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外源性bFGF对坐骨神经损伤后脊髓运动神经元和DRG感觉神经元CGRP变化的影响

作　者: 于连峰
导　师: 王昭金
学　校: 泰山医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 碱性成纤维细胞生长因子坐骨神经脊髓前角运动神经元降钙素基因相关肽背根神经节挤压损伤
分类号: R651.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的探讨坐骨神经损伤后,外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤局部、对应的背根神经节(DRG)、脊髓后角和脊髓前角神经元形态结构和CGRP变化的影响,为周围神经损伤后再生的分子机制提供形态学基础,也为临床治疗周围神经损伤提供理论依据。方法成年雄性Wistar(78只)大鼠随机分成正常组、阳性对照组(单侧坐骨神经损伤建立大鼠坐骨神经损伤模型)、bFGF组(单侧坐骨神经损伤,损伤后局部给bFGF,及术后隔日术侧腓肠肌注射bFGF)。大鼠分别存活1d、3d、7d、14d、21 d和28d,在各时间点灌注固定,取与坐骨神经对应的L4-6脊髓节段和相应的背根神经节(L4-6)以及损伤局部的坐骨神经,冰冻连续切片,然后分别用免疫荧光、免疫组化及尼氏染色等方法分别观察坐骨神经损伤局部、DRG(L4-6)、脊髓后角(L4-6)和脊髓前角(L4-6)神经元、神经纤维的变化,CGRP免疫阳性细胞和纤维的变化以及CGRP的积分光密度值和前角运动神经元平均直径的变化。结果1、bFGF对坐骨神经损伤后脊髓前角(L4-6)运动神经元的影响(1) Nissl染色坐骨神经损伤后可见术侧前角(L4-6)有些外侧群运动神经元呈圆形肿胀,核周Nissl小体开始溶解,并可见明显的胞核移位,胞质内可见有空泡变,一直持续到术后7d。术后14dNissl小体开始恢复,术后21d可见多数运动神经元Nissl小体重新出现,染色较深；术后28d与正常组接近。坐骨神经损伤局部给予bFGF, bFGF能促进Nissl小体溶解后的恢复。bFGF组,损伤后1d术侧前角(L4-6)外侧群部分运动神经元开始肿胀,并可见有Nissl小体溶解消失但不如阳性对照组明显,没见到明显的核移位,一直持续到损伤后7d；术后14d可见大量Nissl小体再生使细胞染色较深；术后21d术侧前角前外侧运动神经元的形态和平均直径与正常组接近,对侧前角运动神经元未见明显变化。(2) CGRP在脊髓前角(L4-6)的表达变化正常组动物脊髓前角(L4-6)内可见有CGRP免疫阳性运动神经元,免疫反应产物呈颗粒状或均质状分布于胞质中,胞核未见标记,主要见于脊髓前角的外侧群神经元,也有一些脊髓前角内侧群神经元呈CGRP阳性。坐骨神经损伤后1d可引起L4-6前角运动神经元CGRP的表达增加,术后7d达峰值,随后缓慢下降,至术后21 d接近正常。bFGF能促进坐骨神经损伤后L4-6前角运动神经元CGRP的合成。bFGF组术后1d术侧前角(L4-6)外侧群运动神经元呈CGRP阳性且染色较深；继而前角(L4-6)外侧群CGRP阳性细胞数目增多且染色更深,与对照组相比有明显差异；术后14d前角(L4-6)外侧群CGRP阳性细胞染色明显变浅,到28d接近正常。2. bFGF对坐骨神经损伤后脊髓后角CGRP阳性纤维的影响正常组脊髓后角CGRP免疫阳性纤维主要位于后角RexedⅠ和Ⅱ板层,也见于RexedⅢ和Ⅳ板层及Lissauer’s束,有许多粗细不等的CGRP阳性纤维从RexedⅠⅡ板层投射到RexedⅢ和Ⅳ板层。坐骨神经损伤后可引起脊髓后角(L4-6)CGRP阳性纤维密度降低。坐骨神经损伤后术侧脊髓后角(L4-6) CGRP阳性纤维的密度较正常组明显下降(P<0.05),主要见于Rexed I和Ⅱ板层；术后7dCGRP阳性纤维密度降至最低,仅见于RexedⅠ,Ⅱ板层；随后CGRP阳性纤维增多,但术后28dCGRP阳性纤维仍未达到正常水平。bFGF能促进坐骨神经损伤后脊髓后角(L4-6) CGRP阳性纤维的恢复。bFGF组术后1d,CGRP阳性纤维在RexedⅠ、Ⅱ板层所占区域较正常组明显减少(P<0.05),染色也有所下降；术后7dCGRP阳性纤维仅见于RexedⅠ、Ⅱ板层,且密度下降到最低；第14dCGRP阳性纤维明显增多,灰质后连合处也可见大量CGRP阳性纤维；第21dCGRP阳性纤维进一步增多,见于RexedⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ板层和灰质后连合处；术后28dCGRP阳性纤维的染色更明亮。3、bFGF对坐骨神经损伤后背根感觉神经元的影响(1)Nissl染色坐骨神经损伤后Nissl染色可见DRG内一些感觉神经元Nissl小体开始溶解,DRG(L4-6)神经元胞体肿胀,随后有些DRG(L4-6)神经元胞质中几乎见不到Nissl小体；术后14d有些DRG(L4-6)神经元Nissl小体开始恢复染色呈深蓝色；至28dDRG细胞数目仍未达到正常水平。bFGF能促进坐骨神经损伤后DRG (L4-6)中小型神经元Nissl小体溶解恢复。bFGF组术后也有DRG(L4-6)神经元Nissl小体溶解消失；术后14d中小型细胞数目较阳性对照组明显增加(P<0.05),且染色更深；术后21d细胞数目与正常组接近,DRG(L4-6)神经元呈深蓝色,但bFGF对大型感觉神经元作用不明显。(2)DRG内CGRP的表达变化正常组动物DRG内可见大量以中小型细胞为主的CGRP免疫阳性神经元,但也可见一些大型感觉神经元呈CGRP阳性,CGRP呈颗粒状均匀分布在胞浆中,细胞核未见标记,也可见到一些CGRP免疫阳性的神经纤维。坐骨神经损伤可引起DRG (L4-6) CGRP合成减少,坐骨神经损伤后术侧DRG (L4-6)内中小型细胞CGRP积分光密度值术后1d就明显低于正常组(P<0.05),一直到第7d降至最低,以后开始升高,但到第28d时仍明显少于正常组；CGRP阳性的大型细胞数目术后明显减少,其细胞数目在整个实验过程中没有明显变化且一直明显低于正常组。bFGF能促进DRG(L4-6)CGRP合成的恢复,坐骨神经损伤后3d,术侧DRG(L4-6)内中小型细胞CGRP积分光密度值明显低于正常组,第7d与阳性对照组类似都明显低于正常组；坐骨神经损伤后14d, CGRP的表达有所增加,至第21 d与正常组接近,明显高于阳性对照组。bFGF组术侧DRG (L4-6)大型神经元的数目和CGRP积分光密度值在整个实验过程中均明显低于正常组(P<0.05), bFGF组与阳性对照组相比没有明显差异。4、bFGF对坐骨神经损伤局部CGRP阳性纤维的影响正常坐骨神经未见或仅见少量CGRP阳性纤维,坐骨神经损伤后可见局部坐骨神经内CGRP阳性纤维增加,坐骨神经损伤后1d,阳性对照组未见CGRP阳性纤维在损伤局部表达；术后3d在损伤局部可见有大量粗细不等的断裂的CGRP阳性纤维；第7d较第3d明显减少；术后14d仅见有极少量的CGRP阳性纤维；第21d和28d在损伤局部几乎见不到CGRP阳性纤维。bFGF组术后1d在坐骨神经损伤局部可见大量粗细不等的断裂的CGRP阳性纤维；术后3d,在损伤局部依然可见大量CGRP阳性纤维；术后7d与3d比CGRP阳性纤维明显减少；术后14d、21d和28d几乎见不到CGRP阳性纤维。结论1、坐骨神经损伤可引起脊髓前角(L4-6)外侧群运动神经元发生Nissl小体溶解、对内侧群神经元无影响；坐骨神经损伤也可引起DRG (L4-6)感觉神经元Nissl小体溶解。2、坐骨神经损伤后可引起脊髓前角(L4-6)外侧群运动神经元CGRP合成增加,DRG(L4-6)部分大中小型感觉神经元CGRP合成减少。3、坐骨神经损伤后给以外源性bFGF能够促进脊髓前角(L4-6)外侧群运动神经元以及DRG(L4-6)中小型神经元CGRP勺合成；对坐骨神经损伤后DRG(L4-6)大型感觉神经元CGRP的表达变化无明显影响。4、外源性bFGF能够促进受损前角(L4-6)运动神经元和DRG(L4-6)中、小型感觉神经元的存活。

全文目录

中文摘要  3-7
英文摘要  7-12
符号说明  12-13
前言  13-16
材料与方法  16-19
结果  19-37
讨论  37-40
结论  40-41
参考文献  41-45
综述  45-51
  参考文献  48-51
致谢  51-52

外源性bFGF对坐骨神经损伤后脊髓运动神经元和DRG感觉神经元CGRP变化的影响

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