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CD133、CD34、CD44作为人肺腺癌肿瘤干细胞标记物的研究

作　者: 王若星
导　师: 喻风雷
学　校: 中南大学
专　业: 心胸外科学
关键词: 人肺腺癌 肿瘤干细胞 表面蛋白标记 CD133 CD34 CD44
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:肺腺癌是当今全球最常见的肿瘤类型之一,危害严重并呈上升趋势,而针对其的治疗方法效果欠佳。如今肿瘤干细胞理论为人们认识和治疗肿瘤带来了新的希望,许多类型肿瘤的肿瘤干细胞相继被按照细胞表面蛋白标记分离出来。可是肺腺癌的肿瘤干细胞却迟迟未能确定,而筛选出合适的表面标记组合是有效分离、鉴定和研究肿瘤干细胞的前提。本实验旨在验证CD133、CD34、CD44作为肺腺癌肿瘤干细胞表面标记物的合理性,为后续的肺腺癌肿瘤干细胞分离工作提供依据,同时也为人肺腺癌肿瘤干细胞标记物确定提供参考。实验方法:本实验利用两种体外培养方法扩增出贴壁细胞和悬浮细胞球两种肿瘤细胞,根据悬浮球肿瘤细胞高度富集肿瘤干细胞的特性再比较CD133、CD34和CD44在两种培养细胞中表达的差异,以确定这三种细胞表面蛋白标记能否作为人肺腺癌肿瘤干细胞的标记物组合。结果:在细胞培养过程中,我们发现悬浮球肿瘤细胞较贴壁肿瘤细胞生长速度慢、维持时间长但成功率低。免疫荧光实验发现CD133、CD34和CD44在悬浮细胞球中表达率和表达量明显高于贴壁肿瘤细胞,即CD133、CD34和CD44在肿瘤干细胞中较一般细胞显著高表达。结论:CD133、CD34和CD44可以作为分离人肺腺癌肿瘤干细胞的表面蛋白表标记组合。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
第一章 绪论研究背景  10-17
  第一节 实验研究绪论  10
  第二节 理论背景:肺腺癌与肿瘤干细胞  10-14
    1.2.1 肺癌及其治疗现状  10-11
    1.2.2 肿瘤干细胞理论、影响及研究状况  11-13
    1.2.3 肺癌及肺腺癌肿瘤干细胞的研究状况  13-14
  第三节 研究方法学  14-17
    1.3.1 细胞的定义与鉴定  14
    1.3.2 肿瘤干细胞的分离方法  14-16
    1.3.3 肿瘤干细胞的培养和保存技术  16-17
第二章 材料与方法  17-24
  第一节 实验材料和仪器  17-18
    2.1.1 主要仪器  17
    2.1.2 主要器械  17-18
    2.1.3 主要试剂  18
  第二节 实验方案  18-19
  第三节 主要实验步骤  19-24
    2.3.1 培养基配制  19
    2.3.2 肿瘤组织的获取  19
    2.3.3 肿瘤原代标本的处理  19-20
    2.3.4 原代肿瘤细胞培养  20
    2.3.5 肿瘤细胞的传代  20
    2.3.6 纯化细胞  20-21
    2.3.7 免疫荧光检测  21-22
    2.3.8 免疫缺陷鼠体内成瘤实验  22-24
第三章 实验结果  24-45
  第一节 细胞培养  24-27
    3.1.1 贴壁细胞的培养  24-26
    3.1.2 悬浮细胞的培养  26-27
    3.1.3 两种培养细胞的比较  27
  第二节 表面标记物表达  27-29
    3.2.1 贴壁细胞的免疫荧光  27-28
    3.2.2 悬浮细胞的免疫荧光  28-29
    3.2.3 贴壁细胞及悬浮肿瘤细胞球各组标本来源患者情况  29
    3.2.4 统计学检验  29
  第三节 免疫缺陷鼠体内成瘤实验  29-30
  第四节 免疫荧光结果  30-45
第四章 讨论  45-50
  第一节 本次实验总结  45
  第二节 本次实验意义  45-47
  第三节 目前存在的问题和领域发展前景  47-50
    4.3.1 细胞培养  47-48
    4.3.2 肿瘤干细胞研究  48-50
第五章 结论  50-51
参考文献  51-53
综述  53-57
参考文献  57-59
致谢  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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