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BMP2诱导豚鼠MSCs分化成骨细胞制备组织工程人工听骨的实验研究

作　者: 史筱璐
导　师: 刘立中
学　校: 新疆医科大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 骨髓间充质干细胞纳米羟基磷灰石流式细胞仪扫描电镜组织工程人工听骨
分类号: R764
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：观察豚鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)与纳米羟基磷灰石(nHA)材料体外复合培养的结合程度,并分析其构建组织工程人工听骨的可行性。方法：(1)采用细胞差速贴壁法分离培养、纯化豚鼠骨髓间充质干细胞,使用流式细胞仪检测CD29、CD45、CD44进行间充质干细胞表面标记物鉴定。采用骨形态发生蛋白2(BMP2)将第三代的MSCs诱导分化为成骨细胞；倒置显微镜下观察细胞形态学变化,诱导后免疫组化染色和成骨诱导并检测其成骨细胞分化能力；(2)将骨髓间充质干细胞与纳米羟基磷灰石共培养1天,3天,5天,7天,10天,电镜观察体外培养的骨髓间充质干细胞与此种支架材料的复合情况；(3)将复合培养5天的支架材料植入豚鼠听泡模型,分别在2周、4周、8周、10周、12周取出组织工程人工听骨进行病理学观察及扫描电镜观察材料的成骨能力。结果：(1)细胞培养的检测：①MSCs的检测：第三代的MSCs形态均一,呈单层生长,细胞多为长梭形,呈旋涡状排列；其表面标记物CD29、CD44和CD45表达分别为95.7%、70%、0.7%；②成骨细胞检测：诱导后倒置显微镜下可见细胞具有成骨细胞形态特征；免疫组化I型胶原检测可观察到细胞内有黄褐色颗粒沉淀,碱性磷酸酶染色见细胞胞浆内出现蓝紫色颗粒,茜素红染色时可见被染成红色的诱导成骨细胞形成的钙结节；(2)体外复合培养3天后,可见大量骨髓间充质干细胞贴附在材料表层,并且形态稳定,生长旺盛,增殖力强,具有极佳的延伸性；培养5天后可见材料表面己全部覆盖骨髓间充质干细胞,细胞结合紧密,细胞表面可见大量分泌颗粒,胞体明显增大,边缘完整,呈纤维样伸长；7天后细胞逐渐从材料表面脱落,仍附在材料表而的细胞出现“星形”改变,“伪足”增多；10天后细胞呈片状脱落；(3)病理学观察到回植10周后的组织工程人工听骨被大量纤维结缔组织包裹,与周围组织相融合；回植12周的人工听骨能谱分析及扫描电镜观察可见材料表面形成了骨陷窝,微量元素含量测定与正常骨组织几乎相同。结论：说明纳米羟基磷灰石材料保持了它良好的生物相容性,利于细胞黏附、增殖,可结合大量的骨髓间充质干细胞,用于构建组织工程人工听骨。

全文目录

中英文缩略词对照表  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-13
内容与方法  13-25
  1 实验材料  13-17
  2 实验方法  17-23
    2.1 MSCs的原代培养及向成骨细胞的诱导鉴定  17-21
    2.2 nHA与MSCs的体外复合式培养及动物模型的制作  21
    2.3 组织工程人工听骨的移植治疗与检测  21-23
  3 质量控制  23
  4 统计方法  23-25
结果  25-31
讨论  31-43
小结  43-44
致谢  44-45
参考文献  45-54
综述  54-60
  参考文献  58-60
攻读硕士期间发表的学术论文  60-61
导师评阅表  61

BMP2诱导豚鼠MSCs分化成骨细胞制备组织工程人工听骨的实验研究

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