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MSMEG_6281基因在耻垢分枝杆菌中的高表达及对细胞形态学的影响

作　者: 任丽萍
导　师: 辛毅
学　校: 大连医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 乙胺丁醇 耻垢分枝杆菌 MSMEG6281 肺结核 自溶素
分类号: R52
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 26次
引　用: 1次
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内容摘要


结核病（Tuberculosis, TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的传染性疾病。近年来,由于多耐药性（multi-drug resistant, MDR）菌株的出现和HIV（Human Immuno deficiency Virus）的协同作用,使得结核病卷土重来,成为当今世界三大传染病之一。乙胺丁醇（Ethambutol,EMB）是抗结核的一线药物之一,对体外培养的结核分枝杆菌的生长有抑制作用。据报道,EMB作用于阿拉伯糖基转移酶,抑制细胞壁的合成。但是,也有研究表明,EMB的作用位点并不是单一的,有可能对细胞壁的其它成分产生影响。为了进一步寻找EMB对结核分枝杆菌的作用靶点,本研究利用生物信息学方法,对EMB作用结核分枝杆菌的基因芯片数据进行系统分析,发现一组与EMB作用相关的基因,其中Rv3717基因在EMB作用于结核分支杆菌后,表达上调。Rv3717在耻垢分枝杆菌中的同源蛋白是MSMEG6281。为了明确该基因的生物学功能,我们利用结核分枝杆菌模式菌耻垢分枝杆菌（M.smegmatis mc2155,简称mc2155）,研究MSMEG6281的高表达对细胞形态学的影响,从而为确定该基因的功能提供前期实验根据。目的:1.探索EMB对耻垢分枝杆菌mc2155作用后细胞生长形态学可能产生的变化。2.确认EMB对MSMEG6281基因的正调控作用。3.当MSMEG6281高表达后,发现细胞的生长速度及形态可能发生的变化,以推测该基因与细胞壁多糖的相关性。方法:1.分光光度法检测EMB对mc2155生长速度的影响;扫描电镜观察EMB对mc2155形态学的影响。2. RT-PCR方法检测MSMEG6281基因在EMB处理mc2155不同时间后在mRNA水平表达的变化。3.构建克隆载体pMD18-MSMEG6281和表达载体pVV16- MSMEG6281;将表达载体转化到mc2155中;用SDS-PAGE和Western Blotting方法检测融合蛋白的表达。4.观察MSMEG6281的高表达对mc2155细胞生长速度的影响。5.扫描电镜观察MSMEG6281的稳定表达对mc2155细胞形态影响。结果:1. EMB作用于mc2155后,细胞生长速度变慢;通过扫描电镜观察到EMB使mc2155细胞变粗、变短,表面变粗糙。2. mc2155经EMB处理,与对照组相比,RT-PCR结果显示,MSMEG 6281的mRNA表达明显上调。3.构建了无突变的pMD18-MSMGE6281克隆载体和pVV16- MSMGE 6281表达载体; SDS-PAGE ,和Western Blotting结果显示,MSMEG6281在mc2155中高表达。4. MSMGE6281在mc2155细胞中的高表达可使细胞生长速度变慢。5. MSMGE6281高表达的菌株,在对数生长期细胞普遍相对变长,而在静止期在一定程度上使细胞变短、变粗。结论:1. EMB作用于mc2155后,抑制细胞生长,并使细胞形态发生改变。2. EMB刺激可使MSMEG6281在mc2155中在mRNA水平表达呈上调趋势。3. MSMGE6281基因在mc2155中的高表达表现可在一定程度上抑制mc2155的生长。4. MSMGE6281在mc2155中的高表达在一定程度上可改变细胞形态,在mc2155生长中发挥重要作用。

全文目录


一、摘要  6-11
  (一) 中文摘要  6-8
  (二) 英文摘要  8-11
二、文献综述  11-20
  (一) 综述  11-17
  (二) 参考文献  17-20
三、正文  20-53
  (一) 前言  20-21
  (二) 材料和方法  21-33
  (三) 结果  33-44
  (四) 讨论  44-48
  (五) 结论  48-49
  (六) 展望  49-50
  (七) 参考文献  50-53
四、致谢  53

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 结核病
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