学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

家蚕微孢子虫与菜粉蝶微孢子虫的形态学与系统发育研究

作　者: 徐小芳
导　师: 沈中元
学　校: 江苏科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 微孢子虫核糖体基因系统进化分析细胞培养感染
分类号: S884
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 28次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

微孢子虫(Microsporidia)是一类能感染经济昆虫、鱼类、兔类、皮毛动物、灵长类的常见病原,属于细胞内专性寄生的单细胞真核生物。目前发现的微孢子虫有1 300多种,分属于160多个属。家蚕微粒子病就是由微孢子虫寄生引起的蚕病,它通过胚种传染和食下传染对蚕业生产造成了很大的影响,是世界上所有养蚕国家作为检疫对象的蚕病。本文从家蚕中分离纯化得到一种小型孢子Endoreticulatus sp. Zhenjiang,孢子形状为卵圆形,大小为(2.9±0.2)μm×(1.2±0.2)μm,对家蚕的致病力较弱,半数感染浓度IC50为85 363个/mL。用特异性PCR方法扩增克隆其核糖体基因全序列,全长为4 432 bp,包括核糖体大亚基基因(LSU rRNA) 2 460 bp,内转录间隔区(ITS) 187 bp,核糖体小亚基基因(SSU rRNA) 1 254 bp,基因间隔区(IGS) 276 bp和5S区域115 bp。研究表明,Endoreticulatus sp. Zhenjiang具有与Nosema bombycis, Glugoides intestinalis相同的核糖体基因反向排列顺序,即5′-LSU-ITS-SSU-IGS-5S-3′。采用MEGA4.0软件构建系统进化树,发现Endoreticulatus sp. Zhenjiang应归纳为内网虫属,且与Glugoides intestinalis有很高的亲缘性。本研究表明,核糖体的反向排列顺利并不仅仅出现在Nosema属,也会出现在包含内网虫属和格留虫属的这一类群上。虽然微孢子虫的传播范围广,但有关菜粉蝶感染微孢子虫的报道目前还比较少。我们对从在镇江地区捕捉到的菜粉蝶中分离的微孢子虫进行了研究,通过SSU rRNA基因的大量克隆测序,结果表明:镇江地区菜粉蝶中微孢子虫种类较多,形态各异,其SSU rRNA基因大小不同,分别为1 227 bp,1 229 bp,1 232 bp,1 233 bp,1 234 bp和1 245 bp。这与前人研究的结果相一致。我们对其中的一种微孢子虫(Nosema sp. MPr)进行进一步的分离纯化,研究结果发现:通过体外感染家蚕BmN细胞,发现该种微孢子虫并不侵染家蚕细胞,对其进行添食实验也不感染家蚕。用特异性PCR方法对其进行核糖体基因核心序列的克隆分析,发现其核糖体基因排列顺序属于传统微孢子虫核糖体基因排列顺序,即SSU rRNA-ITS-LSU rRNA。用MEGA4.0软件对SSU rRNA和LSU rRNA构建系统进化树,其拓扑结构表明, Nosema sp. MPr与Nosema属第二类群微孢子虫处于同一分支中,从分子水平上证实该种微孢子虫归属于Nosema属,暂命名为Nosema sp. MPr。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-13
第1章绪论  13-23
  1.1 研究背景及意义  13-15
    1.1.1 研究背景  13-14
    1.1.2 研究意义  14-15
  1.2 微孢子虫的研究进展  15-21
    1.2.1 微孢子虫的分类和进化地位  15-16
    1.2.2 微孢子虫的超微结构  16-17
    1.2.3 微孢子虫的生活周期  17-18
    1.2.4 微孢子虫分子生物学的研究进展  18-21
  1.3 本论文研究的主要工作  21-23
第2章家蚕中分离的小型微孢子虫(Endoreticulatus sp. Zhenjiang)形态学与系统发育的研究  23-41
  2.1 实验材料  23-25
    2.1.1 微孢子虫  23
    2.1.2 主要试剂  23
    2.1.3 主要仪器和设备  23
    2.1.4 常用溶液和缓冲液的配制  23-25
  2.2 实验方法  25-30
    2.2.1 Endoreticulatus sp. Zhenjiang 微孢子虫的纯化  25
    2.2.2 Endoreticulatus sp. Zhenjiang 微孢子虫大小的测量  25
    2.2.3 扫描电镜的观察  25
    2.2.4 透射电镜的观察  25-26
    2.2.5 Endoreticulatus sp. Zhenjiang 对家蚕感染率的研究  26
    2.2.6 基因组DNA 的制备  26-27
    2.2.7 基因克隆的常规实验操作方法  27-30
  2.3 结果与分析  30-39
    2.3.1 形态学特征  30-31
    2.3.2 Endoreticulatus sp. Zhenjiang 微孢子虫对家蚕的感染率  31-32
    2.3.3 核糖体rRNA 基因的扩增结果与排列顺序  32-34
    2.3.4 核糖体rRNA 基因的序列分析  34-35
    2.3.5 核糖体大亚基（LSU rRNA）基因的序列分析  35-36
    2.3.6 内转录间隔区（ITS）  36
    2.3.7 核糖体小亚基（SSU rRNA）基因的序列分析  36-38
    2.3.8 基因间隔区（IGS）  38
    2.3.9 5S rRNA 基因序列  38-39
  2.4 讨论  39-40
  2.5 本章小结  40-41
第3章菜粉蝶微孢子虫（Nosema sp. MPr）的初步分类与系统发育研究  41-51
  3.1 实验材料  41
    3.1.1 材料  41
    3.1.2 主要试剂  41
    3.1.3 主要仪器与设备  41
  3.2 实验方法  41-43
    3.2.1 菜粉蝶微孢子虫的纯化  41-42
    3.2.2 菜粉蝶微孢子虫向BmN 细胞接种  42
    3.2.3 基因组DNA 的制备  42
    3.2.4 Nosema sp. MPr 核糖体基因组rRNA 的核心序列的扩增  42-43
    3.2.5 PCR 产物的克隆及同源性分析  43
    3.2.6 序列的系统发育进化及其分析  43
  3.3 结果与分析  43-48
    3.3.1 菜粉蝶中所含有的微孢子虫种类  43-44
    3.3.2 对家蚕细胞的侵染能力  44-45
    3.3.3 核糖体基因的扩增结果及排列方式  45
    3.3.4 系统进化分析  45-48
  3.4 讨论  48-49
  3.5 本章小结  49-51
结论  51-53
参考文献  53-59
附录1 Endoreticulatus sp. Zhenjiang 核糖体基因全序列（FJ772431）  59-64
附录2 Nosema sp. MPr 核糖体基因核心序列（HQ399665）  64-69
攻读学位期间发表的学术论文  69-71
致谢  71-72
大摘要  72-76

家蚕微孢子虫与菜粉蝶微孢子虫的形态学与系统发育研究

内容摘要

全文目录

相似论文