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粉纹夜蛾培养细胞对家蚕微孢子虫的吞噬及与孢壁蛋白的关系

作　者: 吴晓霞
导　师: 鲁兴萌
学　校: 浙江大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 家蚕微孢子虫 粉纹夜蛾细胞系 吞噬 孢壁蛋白
分类号: S884
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 14次
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内容摘要


家蚕微孢子虫(Nosema bombycis, Nb)是人类认识的第一种微孢子虫,引发的微粒子病是家蚕的毁灭性传染病,具有水平传播和垂直传播的特性,被确定为世界养蚕地区唯一的检疫病害。解明Nb入侵宿主细胞的相关因素,有助于深入研究Nb对家蚕的侵染机制。为此,本研究利用激光共聚焦显微镜观察Nb孢子接种粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,Tn)培养细胞48h后Nb孢子的分布状态和Tn培养细胞的生长情况。结果发现经0.2 mol/L KOH预处理的Nb孢子接种于Tn培养细胞培养48h后,Nb孢子大量聚集在细胞的周围,而未经KOH预处理的Nb孢子接种于Tn培养细胞培养48h后,孢子则零散分布于细胞之间。通过对接种Nb孢子后的Tn培养细胞培养物总蛋白的SDS-PAGE,发现接种经0.2 mol/L KOH预处理与未经KOH预处理Nb孢子后的Tn培养细胞培养物总蛋白存在明显差异。从而证实0.2 mol/L KOH预处理影响了Nb孢子与Tn培养细胞的吞噬与被吞噬,未经KOH预处理的Nb孢子不能被Tn培养细胞吞噬。另外,对Nb孢子孢壁蛋白的SDS-PAGE分析显示,Nb孢子经0.2 mol/L KOH处理后,孢壁蛋白中大小为80 kD和12 kD的蛋白带缺失或明显减弱,30 kD的蛋白带丰度降低。推测KOH处理使Nb孢子部分孢壁蛋白被分解(部分或完全)或蛋白结构发生变化,由此影响了Nb孢子与Tn培养细胞的相互作用关系,并有利于Tn培养细胞对Nb孢子的吞噬。

全文目录


摘要  8-9
Abstract  9-10
第一章 文献综述  10-19
  1 前言  10
  2 微孢子虫的发芽  10-12
  3 微孢子虫侵染宿主细胞的模式  12-14
  4 微孢子虫侵染与孢壁蛋白的关系  14-17
  5 微孢子虫体内寄生对宿主的影响  17-19
第二章 研究内容  19-40
  1 Nb孢子接种于Tn培养细胞后的激光共聚焦显微镜观察  19-28
    1.1 材料及主要试剂、仪器  19-20
      1.1.1 生物材料  19
      1.1.2 主要试剂  19
      1.1.3 主要设备及仪器  19-20
    1.2 实验方法  20-22
      1.2.1 细胞培养基的配制  20
      1.2.2 粉纹夜蛾培养细胞的继代培养  20
      1.2.3 家蚕微孢子虫的繁殖和纯化  20-21
      1.2.4 家蚕微孢子虫孢子的人工发芽及发芽率的测定  21-22
      1.2.5 家蚕微孢子虫孢子接种Tn培养细胞  22
      1.2.6 激光共聚焦显微镜观察  22
    1.3 试验结果  22-26
      1.3.1 激光共聚焦显微镜观察Nb孢子接种于Tn培养细胞  22-26
    1.4 分析与讨论  26-28
  2 接种Nb孢子的Tn细胞培养物总蛋白图谱的分析  28-35
    2.1 材料及主要试剂、仪器  28-30
      2.1.1 材料  28
      2.1.2 主要设备及仪器  28
      2.1.3 主要试剂及配制方法  28-30
    2.2 实验方法  30-31
      2.2.1 家蚕微孢子虫孢子接种Tn培养细胞  30
      2.2.2 Tn细胞培养物总蛋白的制备  30
      2.2.3 Bradford法测定Tn细胞培养物总蛋白的浓度  30-31
      2.2.4 Tn细胞培养物总蛋白的SDS-PAGE  31
    2.3 实验结果  31-35
      2.3.1 接种Nb孢子的Tn培养细胞培养物总蛋白的SDS-PAGE分析  31-33
      2.3.2 分析与讨论  33-35
  3 KOH处理对家蚕微孢子虫孢子孢壁蛋白的影响  35-39
    3.1 材料及主要试剂、仪器  35-36
      3.1.1 材料  35
      3.1.2 主要设备及仪器  35
      3.1.3 主要试剂及配制  35-36
    3.2 试验方法  36
      3.2.1 家蚕微孢子虫孢子孢壁蛋白的SDS-PAGE  36
    3.3 试验结果  36-37
    3.4 分析与讨论  37-39
  4 小结  39-40
参考文献  40-45
附录1  45-47
致谢  47

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 蚕桑 > 蚕的病虫害及其防治
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