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副猪嗜血杆菌PCR诊断试剂盒的研制和基因工程减毒活疫苗的研究

作　者: 徐慧
导　师: 张培君；徐福洲
学　校: 首都师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 副猪嗜血杆菌 PCR 试剂盒转座突变菌株
分类号: Q789
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是巴氏杆菌科的一种短小革兰氏阴性杆菌,是感染猪的一种呼吸道病原菌,可引起猪呼吸道疾病综合症。Hps在我国乃至全世界广泛流行,给养猪业带来严重的经济损失。目前对Hps的研究时间较短,对它的许多基因的功能、致病机理还不太清楚,该病的防治还比较困难。如构建出突变体库,从中筛选出毒力减弱的副猪嗜血杆菌突变菌株,对研制出基因工程弱毒活疫苗具有重要意义。在特异性和敏感性试验的基础上,组装副猪嗜血杆菌PCR诊断试剂盒。用同一批次材料进行批内试剂盒比较试验,用不同批次材料进行批间试剂盒比较试验。试剂盒特异、敏感,批内和批间的试剂盒无差异。将试剂盒保存于-20℃和4℃,每3个月检测一次。试剂盒在-20℃可保存30个月,4℃可保存12个月。建立了特异性好、敏感性高、保存期长的副猪嗜血杆菌PCR诊断试剂盒。以国内广泛流行且毒力较强的副猪嗜血杆菌血清5型为对象,将EZTn5＜R6Kγori/KAN-2＞转座系统电转到副猪嗜血杆菌血清5型菌株内。在转座酶的作用下,转座子EZTn5＜R6Kγori/KAN-2随机插入Hps的基因组DNA中。通过Kan抗性初筛得到581个克隆,并从581个克隆中利用PCR扩增插入片断的方法和点杂交方法筛选得到22株突变菌株。以小鼠作为动物模型作攻毒试验,筛选到3株毒力减弱的突变菌株。它们与亲本菌株相比,毒力明显下降。本试验为研发弱毒疫苗奠定了初步基础。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-6
目录  6-7
图表目录  7-8
缩略词表  8-10
第一章引言  10-20
  1.1 副猪嗜血杆菌病的研究进展  10-15
  1.2 转座突变技术的研究进展  15-18
  1.3 研究的目的和意义:  18-20
第二章副猪嗜血杆菌 PCR 诊断试剂盒的研制  20-33
  2.1 前言  20-21
  2.2 试验材料  21-22
  2.3 实验方法  22-24
  2.4.试验结果  24-31
  2.5 讨论  31
  2.6 小结  31-33
第三章副猪嗜血杆菌基因工程减毒活疫苗的研究  33-54
  3.1 前言  33-34
  3.2 试验材料  34-38
  3.3 实验方法  38-45
  3.4 结果与分析  45-51
  3.5 讨论  51-52
  3.6 下一步设想  52-53
  3.7 小结  53-54
第四章结论与展望  54-55
  4.1 结论  54
  4.2 展望  54-55
参考文献  55-61
致谢  61-62
攻读硕士期间发表的论文  62

副猪嗜血杆菌PCR诊断试剂盒的研制和基因工程减毒活疫苗的研究

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