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TLR9在CHB患者PBMCs中的表达及CpG-ODN对TLR9调节作用的研究

作　者: 白玉
导　师: 冷静
学　校: 广西医科大学
专　业: 微生物学
关键词: 乙肝病毒外周血单个核细胞 TLR9 CpG-ODN
分类号: R512.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 69次
引　用: 1次
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内容摘要

目的:通过测定慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B, CHB)患者外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMCs)中病毒核酸识别受体-TLR9(Toll like receptor 9, TLR9)的表达情况,了解HBV感染与TLR9的相关关系。并通过CpG寡脱氧核苷酸( CpG oligodeoxynucleotides, CpG-ODN)对CHB患者PBMCs中TLR9调节作用的研究,探讨是否可以通过CpG-ODN对CHB患者PBMCs中TLR9表达的调节,起到抵抗HBV感染的作用,为今后抗HBV感染有效药物的筛选提供实验平台。方法:(1)收集入院治疗的CHB患者,检测乙肝两对半和HBV DNA拷贝数,据测定结果设实验组(CHB患者组),对照组(健康志愿者组)。采用Optiprep(TM混合法)分离实验对象PBMCs,RT-PCR法检测PBMCs中TLR9 mRNA的表达情况。(2)CpG-ODN分别对CHB患者和健康志愿者PBMCs进行体外刺激,以1640培养基为非刺激空白对照。通过RT-PCR方法检测刺激前后TLR9 mRNA的表达情况;ELISA方法检测PBMCs培养上清中IFN-α的浓度;细胞组织化学方法检测刺激前后TLR9蛋白水平的表达情况。结果:(1)CHB患者PBMCs中TLR9的表达情况:RT-PCR结果显示CHB患者组TLR9在PBMCs中的表达明显低于健康对照组(P<0.01)(;2)CpG-ODN体外刺激PBMCs后TLR9的表达情况:RT-PCR结果证明,CpG-ODN刺激后CHB患者和健康志愿者PBMCs TLR9 mRNA的表达均明显高于其各自的1640空白对照组(P<0.01,P<0.01);但是,CpG-ODN体外刺激后,CHB患者CpG-ODN刺激组TLR9 mRNA的表达仍低于健康志愿者1640空白对照组(P<0.01);(3)CpG-ODN体外刺激PBMCs后IFN-α的分泌情况:CpG-ODN体外刺激后,CHB患者和健康志愿者PBMCs分泌IFN-α的水平分别与其各自的1640空白对照组相比较有明显增加(P<0.01,P<0.01);但是CpG-ODN刺激后,CHB患者PBMCs分泌IFN-α的水平低于健康志愿者(P<0.01);(4)PBMCs中TLR9 mRNA的表达与培养上清中IFN-α含量的相关性分析:PBMCs中TLR9 mRNA的表达与培养上清中IFN-α的含量呈正相关,相关系数为0.686(P<0.01);(5)细胞免疫化学结果证明,CpG-ODN刺激后CHB患者和健康志愿者PBMCs胞浆中TLR9的受体表达阳性率均有所升高。结论:CHB患者PBMCs中TLR9表达显著低于健康对照,提示CHB患者PBMCs识别HBV核酸DNA的能力下降;CHB患者和健康对照PBMCs中TLR9的表达与IFN-α的分泌存在明显正相关性,提示TLR9的表达水平与CHB患者和健康对照PBMCs抗HBV感染的能力存在相关关系;CpG-ODN可以有效地激活CHB患者和健康对照PBMCs中TLR9的表达,同时增强PBMCs对I-型IFN的分泌,提示可以通过采用CpG-ODN促使机体的天然免疫系统发挥抗HBV感染的效应。

全文目录

一、论文  4-46
  1、本文主要缩略语  4-6
  2、中文摘要  6-8
  3、英文摘要  8-10
  4、前言  10-13
  5、实验材料  13-16
  6、实验方法  16-26
  7、实验结果  26-36
  8、讨论  36-41
  9、结论  41-42
  10、参考文献  42-46
二、综述  46-60
  1、正文  46-55
  2、参考文献  55-60
三、致谢  60

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 传染病 > 病毒传染病 > 病毒性肝炎 > 乙型肝炎
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