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美国白蛾优良Bt菌株筛选及其与高效氯氰菊酯的相容性

作　者: 赵焕丽
导　师: 陆秀君
学　校: 河北农业大学
专　业: 农业昆虫与害虫防治
关键词: 苏云金芽孢杆菌 美国白蛾 筛选 基因型鉴定 高效氯氰菊酯 相容性
分类号: S476.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


美国白蛾（Hyphantria cunea （Drury））是世界性检疫害虫,自1979年传入我国后猖獗危害,给我国的农林业造成巨大的损失。为了得到对美国白蛾高毒力Bt菌株,本实验采用生物测定的方法,对优良菌株进行了筛选。在此基础上,对其杀虫谱、基因型及其与高效氯氰菊酯（β- cypermethrin）的相容性等方面进行了研究。包括以下主要结果。1.经过系统生物测定,得到了美国白蛾高毒力野生菌株Bt S-19,其杀虫谱较广。Bt S-19对初孵幼虫、二龄、三龄、四龄和五龄美国白蛾幼虫72h LC50值分别为1.8×105 cells/mL、2.3×105 cells/mL、8.1×105 cells/mL、1.3×106 cells/mL和3.1×106 cells/mL。对棉铃虫（Helicoverpa armigera）、粘虫（Mythimna separata）、淡色库蚊（Culex pipiens paliens）、甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）表现了较好的活性,而对杨扇舟蛾（Clostera anachoreta）活性较差。对棉铃虫、粘虫初孵幼虫72 h LC50分别为9.03×106cells /mL,3.1×107cells /mL;对淡色库蚊24 h LC50为3.45×104 cells /mL;对初孵甜菜夜蛾72h校正死亡率为94±0.15%;对二龄杨扇舟蛾96h校正死亡率为26.8±0.05%。2. Bt S-19晶体为小菱形,生长对数期为2-5h。基因型丰富,与已报道的其他对美国白蛾高毒力菌株基因型存在差异。分别利用cry1、cry2、cry3、cry7、cry8、cry9和vip3A基因引物进行基因型鉴定,对扩增片段及限制性酶切片段进行分析比对结果表明,该菌株含有基因cry1Aa、cry1Ab、cry1Ga、cry1Af、cry2Ab和vip3A基因,SDS-PAGE分析也表明,晶体蛋白的分子量主要为130kD、70kD和57kD,营养期为88kD。3. Bt预处理提高高效氯氰菊酯对美国白蛾的杀虫活性。生物测定比较了Bt S-19预处理及与高效氯氰菊酯混用两种情况下,对美国白蛾活性的差异。经Bt预处理后再使用农药组,24h、48h LC50分别为1.243 0mg /L、0.762 5mg /L,单剂对照则分别为4.075 1mg /L、1.281 1mg /L,且高效氯氰菊酯浓度低至1.0 mg/L时,LT50较对照缩短36h,表现明显增效,增效系数分别为330、168;而混用组72h后,当高效氯氰菊酯浓度低于6 mg /L时两者间有增效作用,而高于7.5 mg /L时表现出轻微拮抗。因此,在实践中,先使用Bt再喷施高效氯氰菊酯,可以达到减少农药的用量,发挥两者协同增效作用的目的。4.高浓度高效氯氰菊酯影响Bt芽孢的萌发及营养体裂殖,可能是导致两者混用表现拮抗的原因。观察各浓度农药、Bt混合液中芽孢和晶体形态,随时间延长,两者形态变化均不明显,但高浓度农药、Bt混合液中Bt菌生长缓慢,对数期延迟,Bt菌蛋白浓度与农药浓度程负相关;混合时间越长,趋势越明显。由此推测高效氯氰菊酯可能影响芽孢的萌发及营养体的分裂,进而影响Bt的杀虫活性。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
1 引言  9-19
  1.1 天敌昆虫在美国白蛾防治上的应用  10
  1.2 植物源杀虫剂在美国白蛾防治上的应用  10-11
  1.3 昆虫病原微生物在美国白蛾防治上的应用  11-18
  1.4 问题与展望  18-19
2 材料与方法  19-27
  2.1 材料  19-20
    2.1.1 供试菌株、药剂  19
    2.1.2 培养基  19
    2.1.3 试剂  19
    2.1.4 试虫  19-20
    2.1.5 仪器设备  20
  2.2 研究方法  20-27
    2.2.1 高毒力菌株的筛选  20-21
    2.2.2 Bt S-19 菌生物学特性研究  21
    2.2.3 PCR-RFLP 模板制备  21
    2.2.4 PCR 反应  21
    2.2.5 琼脂糖凝胶电泳  21
    2.2.6 高毒力菌株基因型鉴定及 PCR-RFLP 分析  21-22
    2.2.7 酶切体系  22-23
    2.2.8 cry1/cry2/cry3/cry7/cry8/cry9 基因的PCR-RFLP 鉴定体系  23-25
    2.2.9 高毒力菌株蛋白SDS-PAGE 分析  25
    2.2.10 高效氯氰菊酯和苏云金芽孢杆菌对美国白蛾的协同作用  25-26
    2.2.11 高效氯氰菊酯对Bt S-19 影响机制研究  26-27
3 结果与分析  27-36
  3.1 Bt 晶体期高毒力菌株的初步筛选  27
  3.2 高毒力菌株LC_(50) 的测定  27-28
  3.3 Bt S-19 对不同龄期美国白蛾幼虫LC_(50) 测定  28
  3.4 Bt S-19 杀虫谱的测定  28-29
  3.5 Bt S-19 菌株生物学特性的研究  29-30
  3.6 Bt S-19 PCR-RFLP 分析及SDS-PAGE  30-31
  3.7 高毒力菌株与低毒力菌株基因型差异一览表  31
  3.8 高效氯氰菊酯与Bt S-19 菌对美国白蛾协同作用研究  31-34
  3.9 高效氯氰菊酯对Bt S-19 菌影响机制研究  34-36
4 讨论  36-37
5 结论  37-38
参考文献  38-43
在读期间发表的学术论文  43-44
作者简介  44-45
致谢  45

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 各种防治方法 > 生物防治 > 微生物病源的利用
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