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双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程中代谢组学研究

作　者: 赵旅龙
导　师: 罗国安
学　校: 清华大学
专　业: 化学
关键词: 双龙方骨髓间充质干细胞诱导分化代谢物组学中药干预
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

双龙方是由丹参和人参两味药材所组成的中药复方配伍,具有“益气养血、活血通脉”的功能,适用于治疗冠心病、心绞痛和心肌梗死等心血管疾病。骨髓间充质干细胞(MSCs)在一定条件之下定向分化为心肌细胞,对细胞移植治疗心肌梗死有重要的意义。本论文在代谢组学的层面上,研究中药复方双龙方对大鼠骨髓间充质干细胞的干预结果,寻找细胞代谢物在诱导过程中的变化。为此我们先对复方的组分配伍(总丹酚酸、人参总皂苷)及成分配伍(Sal B、Rb1)进行化学分析,通过HPLC/MS的方法确定了其中的11种化学成分,明确复方当中的化学组成。然后又采用了离子对色谱法进行分离,离子阱质谱仪作检测,建立起分析MSCs代谢物的HPLC/MS方法,筛选出30种细胞代谢物,包括了核苷酸类、氨基酸类和糖代谢类,对其中的28种进行定量,并作了方法学考察。在上述的基础上,进行了细胞代谢物组学研究。考察了干细胞在第0、10、20、30和35天的分化情况,比较空白组、5-aza诱导组、双龙方组分组和双龙方成分组之间的差别,得到了初步结果。双龙方组分组和5-aza诱导组中,有5种代谢物(AMP、Tau、ADP、Glu和Thr)在诱导第35天时浓度水平接近,说明这两个组具有相似疗效,与实验室前有的结果相符合。体现出中药复方配伍的必要性和科学性,在一定程度上具有与西药相似的治疗效果。结果对双龙方干预MSCs分化中代谢物的变化情况提供了参考。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-10
第1章前言  10-19
  1.1 MSCs 及其分化研究  10-11
  1.2 MSCs 的大分子研究  11-13
  1.3 MSCs 的小分子研究  13-15
    1.3.1 代谢物组学  13
    1.3.2 细胞代谢物组学  13-15
  1.4 中药复方药理的研究现状  15-17
    1.4.1 中药复方研究思路  15
    1.4.2 中药诱导MSCs 分化研究进展  15-16
    1.4.3 双龙方及其研究现状  16-17
  1.5 本论文的研究内容  17-19
第2章双龙方有效组分成分分析研究  19-36
  2.1 实验部分  20-21
    2.1.1 试剂和药品  20
    2.1.2 仪器和设备  20
    2.1.3 液相分离条件  20-21
    2.1.4 质谱条件  21
    2.1.5 待测样品准备  21
  2.2 结果与讨论  21-35
    2.2.1 双龙方成分配伍峰的指认  21-25
    2.2.2 双龙方组分配伍峰的指认  25-34
    2.2.3 双龙方组分配伍峰的推断  34-35
  2.3 本章小结  35-36
第3章 MSCs 代谢物分析方法研究  36-90
  3.1 实验部分  39-41
    3.1.1 试剂和药品  39-40
    3.1.2 仪器和设备  40-41
  3.2 色谱/质谱方法的确定  41-47
    3.2.1 流动相组成的确定  42-44
    3.2.2 梯度洗脱条件的确定  44-46
    3.2.3 质谱条件的确定  46-47
  3.3 混合标准品各峰的指认  47-64
  3.4 样品前处理方法的确定  64-68
    3.4.1 一般的操作程序  64-65
    3.4.2 提取步骤的确定  65-68
  3.5 分析方法的确证  68-89
    3.5.1 混合标准品的准备  69-73
    3.5.2 检出限及定量限  73-74
    3.5.3 标准曲线和线性范围  74-80
    3.5.4 稳定性  80-82
    3.5.5 精密度  82-86
    3.5.6 回收率  86-89
  3.6 本章小结  89-90
第4章双龙方干预MSCs 分化过程研究  90-113
  4.1 实验部分  91-96
    4.1.1 试剂和药品  91
    4.1.2 仪器和设备  91
    4.1.3 溶液的配制  91-92
    4.1.4 灭菌操作  92-93
    4.1.5 实验动物  93
    4.1.6 大鼠MSCs的提取及培养  93-94
    4.1.7 实验设计及分组  94-95
    4.1.8 细胞样品的取出  95
    4.1.9 细胞样品的前处理  95
    4.1.10 细胞样品的分析  95-96
  4.2 结果与讨论  96-112
    4.2.1 细胞计数  96
    4.2.2 各组代谢物浓度数据  96-101
    4.2.3 PCA 聚类分析结果  101-107
    4.2.4 样品代谢物浓度分析  107-111
    4.2.5 小结  111-112
  4.3 本章小结  112-113
第5章结论  113-114
  5.1 研究总结  113
  5.2 需进一步开展的工作  113-114
参考文献  114-119
致谢  119-120
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果  120

双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程中代谢组学研究

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