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玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

作　者: 王照鹏
导　师: 王哲
学　校: 吉林大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 玉米赤霉烯酮单克隆抗体间接竞争ELISA
分类号: S816
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 245次
引　用: 3次
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内容摘要

玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEN)又称F-2毒素,主要是由禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等产生的2,4-二羟基苯甲酸内酯类化合物,相对分子质量为318。ZEN主要污染玉米、小麦、大麦、燕麦等作物。Plcinta对世界上近20个国家的谷物和动物饲料中的真菌毒素调查后发现,大多数国家的谷物和动物饲料中都不同程度地受到ZEN的污染。ZEN具有很强的雌性激素作用,可引起猪、大鼠、小鼠、家禽等动物的雌激素过多症和严重的生殖道症状和不孕症,还具有免疫毒性、基因毒性等,ZEN对人也有雌激素作用。由于ZEN在谷物中污染的普遍性和对人畜的高度危害,到2003年,全世界已有19个国家制订了食品中ZEN的限量标准,而且欧盟于2005年制定了食品中ZEN统一限量标准。目前我国尚未建立食品中ZEN的国家标准检测方法,为保护我国在世界粮食贸易中的经济利益和消费者健康,迫切需要建立测定ZEN的国家标准检测方法,并制订其限量标准。本研究为建立灵敏度高、线性范围宽、安全、仪器设备简单、操作方便、分析快速的ZEN检测方法提供参考。本实验利用活泼酯法将ZEN分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)进行偶联,成功制备了检测抗原和免疫抗原。采用常规免疫和加强免疫相结合的方法,免疫BALB/c小鼠。将免疫后血清效价达到1:16000以上的BALB/c小鼠取脾细胞与Sp2/0细胞进行融合、筛选和克隆化,共获得5株能稳定分泌抗ZEN的单克隆抗体杂交瘤细胞,分别命名为3F1、5H10、5B4、2D1、1D4。对单抗的特性进行分析后,选择单抗3F1用于建立ZEN的间接竞争ELISA检测方法,检测条件优化后,绘制了标准曲线,其线性回归方程为y=-0.3397x+0.8827,R2=0.9929,检测线性范围为2～200 ng/mL,最低检测浓度为2 ng/mL。本研究为ZEN化学发光酶免疫分析检测试剂盒的研制奠定了基础。

全文目录

内容提要  5-9
前言  9-11
第一篇文献综述  11-19
  第1章玉米赤霉烯酮研究进展  11-16
    1.1 理化性质及代谢  11
    1.2 ZEN 的污染情况  11-12
    1.3 ZEN 的毒性  12-13
    1.4 ZEN 毒性机理  13-14
    1.5 ZEN 的脱毒措施  14-15
    1.6 ZEN 的预防与控制  15-16
  第2章玉米赤霉烯酮检测方法研究进展  16-19
    2.1 TLC 法  16
    2.2 LC 法  16-17
    2.3 酶联免疫吸附法  17-18
    2.4 GC 法  18
    2.5 微生物检测法  18
    2.6 小结  18-19
第二篇研究内容  19-47
  第1章玉米赤霉烯酮完全抗原的制备与鉴定  19-26
    1.1 材料  19-20
    1.2 方法  20-22
    1.3 结果  22-23
    1.4 讨论  23-24
    1.5 小结  24-26
  第2章玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及鉴定  26-37
    2.1 材料  26-27
    2.2 方法  27-32
    2.3 结果  32-34
    2.4 讨论  34-36
    2.5 小结  36-37
  第3章玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA 检测方法的建立  37-47
    3.1 材料  37-38
    3.2 方法  38-39
    3.3 结果  39-44
    3.4 讨论  44-45
    3.5 小结  45-47
结论  47-48
参考文献  48-54
致谢  54-55
详细摘要  55-56
Abstract  56-58
导师简介  58-59
作者简介  59

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

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