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牛结核诊断方法的比较与牛分枝杆菌的分离与鉴定

作　者: 杨经纬
导　师: 范伟兴；姜平
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 牛结核变态反应伽玛干扰素试验分枝杆菌群定型
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

近年来,结核病的感染与发病越来越严重。牛结核病与人结核病密切相关。人结核病可以传染给牛,人结核病的存在严重制约着牛结核病的彻底地消灭。牛结核病又能传染给人,牛结核病的存在严重威胁着人类的健康。因此,加强牛结核病的监测,控制牛结核病十分重要。结核病的诊断主要依靠病原学检查,但所需周期长,阳性率不高。皮内变态反应诊断是我国的法定诊断方法,但存在着诸多不足。本论文试图对现在我国常用的诊断方法和国际先进诊断方法进行比较,以促进我国牛结核检疫水平的提高。同时,选择牛结核病阳性的牛,进行牛分枝杆菌分离,并应用先进的基因定型方法进行鉴定。1.国内外诊断方法的比较:同时应用欧盟比较皮内变态反应、传统皮内变态反应对200头奶牛进行试验,3天后,采集这200头牛的肝素抗凝全血,经全血培养、抗原刺激,用BOVIGAMTM干扰素(IFN-γ)试剂盒检测上清。结果200头奶牛中,比较皮内变态反应阳性牛、传统皮内变态反应阳性牛和γ-干扰素阳性牛分别为91头、98头和95头,γ-干扰素检测与传统变态反应、比较变态反应的符合率分别为92.86%和95.79%。此外,3头奶牛在传统变态反应试验中为阳性而在比较变态反应试验中为阴性,证明禽分枝杆菌对传统的牛结核变态反应有干扰。2.牛分枝杆菌分离与鉴定:选择两头国产结核菌素、进口结核菌素皮内变态反应及γ-干扰素均为阳性的牛,进行剖检,采集肺脏、淋巴病变组织进行细菌分离。经5天培养后,均有分枝杆菌生长,将生长的菌接种于改良罗氏培养基扩大培养,抗酸染色均为草兰氏阳性。用DNeasy Tissue Handbook试剂盒同时提取人结核Rv37、标准牛型菌株和2株临床分离株的DNA。以人结核Rv37、标准牛型菌株的DNA作为模板,用16s RNA、Rv0577、IS1561、Rv1510(RD4)、Rv1970(RD7)、Rv3877/8(RD1)和Rv3120(RD12)等7引物建立结核分枝杆菌群的定型PCR方法。用建立的定型PCR方法对提取的临床分离株进行扩增,经与标准菌株比对后,确定分离的细菌为牛型分枝杆菌,分别将其命名为M.bovis-Changping07101和M.bovis-Changping07102。

牛结核诊断方法的比较与牛分枝杆菌的分离与鉴定

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