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PI3K-AKT-mTOR信号通路对Foxp3基因表达的影响

作　者: 彭磊磊
导　师: 葛圣林
学　校: 安徽医科大学
专　业: 外科学
关键词: 雷帕霉素 PI3K/Akt/mTOR信号通路 Foxp3 CD4~+CD25~+Treg细胞
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的研究不同剂量雷帕霉素对小鼠体内Treg细胞的影响;探讨不同剂量雷帕霉素对Foxp3基因表达及mTOR活化的影响,进一步分析Foxp3基因表达程度与PI3K-AKT-mTOR信号通路的激活程度是否具有相关性,为探索RAPA诱导Foxp3基因表达的具体机制提供一条新的思路。方法将SPF级昆明系小鼠60只随机分为对照组(A)和实验组(B、C、D), B、C、D三组分别灌胃雷帕霉素0.2mg·d_-1、0.4 mg·d_-1、0.6 mg·d_-1,A组每天予以无菌水灌胃,共3周。3周后,无菌条件下心脏采血, EDTA抗凝,分离脾脏,制备单细胞悬液,采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾脏中CD4~+CD25~+调节性T细胞水平(CD4~+CD25~+Treg细胞占CD4~+ T细胞的百分比),RT-PCR检测小鼠脾细胞Foxp3mRNA的表达,免疫组织化学SP法染色观察小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的变化,并利用计算机图像分析技术测量各实验组及对照组中p-mTOR蛋白表达的平均光密度。结果1实验组(B、C、D)小鼠外周血和脾细胞中CD4~+CD25~+Treg细胞水平分别为(9.62±1.43、13.76±1.97、15.41±2.45) %和(12.23±4.56、23.03±6.18、25.17±6.42) % ,对照组(A)小鼠外周血和脾细胞中CD4~+CD25~+Treg细胞水平分别为(3.52±0.65) %和(6.53±3.01) % ,无论是在外周血还是脾细胞中, B、C、D组CD4~+CD25~+Treg细胞水平明显高于A组( P< 0.05),C、D组与B组之间CD4~+CD25~+Treg细胞水平也有明显差异性( P< 0.05),C组和D组之间CD4~+CD25~+Treg细胞水平无明显差异性( P>0.05)。2 Foxp3mRNA在实验组(B、C、D)小鼠脾脏中表达的程度分别为(0.4853±0.0574、0.7886±0.1085、0.9639±0.2015),明显高于对照组A(0.1345±0.0271)( P< 0.05);实验组(B、C、D)小鼠脾脏中p-mTOR蛋白表达的平均光密度分别为(0.2326±0.0431、0.1156±0.0223、0.0556±0.0041),明显低于对照组A(0.4223±0.0534)( P< 0.05);两指标经pearson相关分析,小鼠脾脏中Foxp3mRNA的表达与p-mTOR蛋白表达呈负相关。结论1雷帕霉素能够诱导昆明系小鼠体内CD4~+CD25~+Treg细胞增殖,其使用剂量可以影响CD4~+CD25~+Treg细胞的增殖程度。2抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路会促使Foxp3的表达增强;PI3K-AKT-mTOR信号通路的激活程度与Foxp3的表达程度呈负相关。

全文目录

英文缩写一览表  4-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-11
材料与方法  11-20
结果  20-25
讨论  25-31
结论  31
参考文献  31-36
附图  36-41
个人简历  41-42
致谢  42-43
综述  43-51
  参考文献  49-51

PI3K-AKT-mTOR信号通路对Foxp3基因表达的影响

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