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西罗莫司对大鼠调节性T细胞的分化、增殖的影响及其意义

作 者: 饶建华
导 师: 张峰
学 校: 南京医科大学
专 业: 普外科
关键词: 西罗莫司 TGF-β 调节性T细胞 CD4~+CD25~+T细胞 FoxP3 IL-10 肝脏 缺血再灌注损伤
分类号: R965
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


第一部分:西罗莫司体外诱导大鼠初始CD4+T细胞为调节性T细胞目的:采用西罗莫司在体外诱导初始CD4+T细胞为调节性T细胞,并了解其诱导的机制。方法:体外分离出大鼠外周血PBMC内的Naive CD4(CD4+CD25- CD62L+T)细胞,在体外经过anti-CD3/CD28-beads的TCR刺激后,伴有IL-2,和/或TGF-β,和/或西罗莫司诱导7天后,检测细胞表面CD4+、CD25+、CD127low等和细胞内的FoxP3,CTLA-4等的表达。通过混合淋巴细胞培养分析诱导后细胞体外抑制活性。结果:西罗莫司能够诱导TCR刺激后的Na?ve CD4细胞成为FoxP3+T细胞,西罗莫司的该作用在加入ALK5阻断剂后消失。西罗莫司联合TGF-β能够诱导出免疫抑制功能的CD4SRL,该细胞表达膜表面的TGF-β,其体外抑制功能在加入ALK5阻断剂后丧失。结论:西罗莫司能够增加CD4+T细胞FoxP3的表达依赖于TGF-β信号;西罗莫司能够联合TGF-β在体外诱导出类似于nTreg表型的FoxP3+ T细胞。这群细胞高表达趋化因子的受体,该细胞本身在TCR刺激时并不在增殖。西罗莫司联合TGF-β诱导的Treg表达膜表面的TGF-β,其抑制活性依赖于mTGF-β。第二部分:西罗莫司诱导大鼠体内CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的增殖目的:探讨西罗莫司(SRL)对大鼠体内CD4+CD25+ FoxP3+调节性T细胞的影响。方法:将200+220g的清洁级大鼠20只随机分成实验组和对照组(10只/组),实验组每只灌胃SRL 2mg/kg/d,对照组灌胃每天给予等体积的生理盐水,共两周。无菌件下下腔静脉采血,并分离脾脏及胸腺,制备单个核细胞悬液。采用流式细胞术检测大鼠外周血,脾脏及胸腺内CD4+CD25+T细胞的占单个核细胞的比例,实时定量PCR(real-time PCR)检测大鼠脾脏细胞FoxP3 mRNA的表达,采用ELISA检测外周血血清的TGF-β和IL-10的含量。结果:实验组大鼠外周血,脾脏和胸腺中CD4+CD25+T细胞的比例较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。real-time PCR显示实验组大鼠脾脏细胞FoxP3 mRNA的表达明显高于对照组,约为对照组的4.1倍。外周血ELISA结果显示实验组TGF-β和IL-10显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论: SRL能够诱导大鼠体内CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞增殖,且增加体内免疫抑制性细胞因子TGF-β和IL-10的分泌。第三部分:西罗莫司预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用目的:探讨西罗莫司(SRL)预处理对大鼠肝脏缺血再灌注的保护作用及机制。方法:将220-250克雄性SD大鼠48只随机分成4组(12只/组),A组:生理盐水假手术组,B组:西罗莫司假手术组,C组:生理盐水实验组,D组:西罗莫司实验组。西罗莫司组每只灌胃西罗莫司2mg/kg/d,生理盐水组每天灌胃等体积无菌生理盐水,共两周。建立大鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型,复流24h后采集标本,测定血清中转氨酶ALT和AST,光镜下观察HE染色肝组织的变化,采用流式细胞术检测大鼠肝脏组织中CD4+CD25+T细胞占单个核细胞的比例,real-time PCR检测大鼠肝脏细胞FoxP3 mRNA的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中TGF-β,IL-10的含量。结果:西罗莫司实验组ALT及AST较生理盐水实验组明显降低(P<0.05),组织学损伤也明显减轻;各组肝组织中CD4+CD25+T细胞占单个核细胞的比例分别是(6.12±1.87)%,(22.36±6.75)%,(4.53±1.02)%和(13.29±3.16)%,且西罗莫司预处理组Foxp3 mRNA表达明显高于生理盐水组(P<0.05);ELISA结果显示,西罗莫司预处理能明显增加外周血TGF-β和IL-10的含量(P<0.05)。结论:西罗莫司预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有明显的保护作用,这可能与西罗莫司预处理预先诱导大鼠体内CD4+CD25+FoxP3+T调节细胞分化,增加TGF-β,IL-10的分泌,抑制炎症反应有关。

全文目录


缩略词  4-6
摘要  6-9
ABSTRACT  9-13
第一部分 西罗莫司体外诱导大鼠初始CD4+T 细胞为调节性T 细胞  13-31
  前言  13
  1. 材料与方法  13-16
  2. 结果  16-25
  3. 讨论  25-26
  4. 小结  26-28
  参考文献  28-31
第二部分 西罗莫司诱导大鼠体内CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T 细胞的增殖  31-40
  前言  31
  1 材料与方法  31-33
  2. 结果  33-35
  3. 讨论  35-36
  4. 小结  36-38
  参考文献  38-40
第三部分 西罗莫司预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用  40-51
  前言  40
  1. 材料与方法  40-44
  2. 结果  44-48
  3. 讨论  48-49
  4. 小结  49-50
  参考文献  50-51
文献综述  51-61
  参考文献  56-61
附录  61-72
致谢  72-73

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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