学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

HBx稳定细胞株L02与HepG2的构建及其对GSK3β表达的影响

作　者: 喻垚
导　师: 冯涛
学　校: 重庆医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: HBx 稳定细胞株 肝癌 细胞增殖 GSK3β
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 38次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的利用HBx逆转录病毒感染人正常肝细胞L02与人肝癌细胞HepG2,构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的L02与HepG2细胞。观察比较HBx对L02与HepG2细胞增殖、凋亡以及细胞周期的影响,同时检测糖原合成酶激酶3β(GSK3β)表达及活性在两株细胞中的改变,探讨HBV相关性肝癌(HCC)的发病机制。方法构建HBx逆转录病毒,分别感染L02与HepG2细胞,在基因和蛋白水平上确定HBx在细胞中的稳定表达;MTT法检测L02与HepG2细胞的增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率以及细胞周期中各时相所占比例;Western blot法检测t-GSK3β、p-GSK3β、β-catenin以及CyclinD1的蛋白表达水平。结果成功构建HBx逆转录病毒,感染L02与HepG2细胞,经抗生素筛选得到阳性细胞,通过RT-PCR和Western blot在RNA以及蛋白水平上检测到HBx在两株细胞中的稳定表达;MTT法和流式细胞术检测到L02-HBx细胞增殖率随着时间的增加而增加,G1期细胞周期相比例较对照组减少,G2期较对照组增加,细胞凋亡率减少(P<0.05);MTT法和流式细胞术检测HepG2-HBx细胞增殖不明显,与对照组相比其S期比例增多,但G2期比例明显减少(P<0.05),同时细胞凋亡率增多;L02-HBx细胞与对照组相比,t-GSK3β在mRNA水平和蛋白水平上表达均无明显变化,p-GSK3β、β-catenin以及CyclinD1蛋白的表达增加(P<0.05);HepG2-HBx与对照组相比t-GSK3β在mRNA水平和蛋白水平上均增加,p-GSK3β、β-catenin以及CyclinD1蛋白的表达无明显改变。结论1.逆转录病毒在体外能有效感染人肝细胞系L02与HepG2,成功构建稳定表达HBx蛋白的L02-HBx细胞与HepG2-HBx细胞模型。2. HBx对L02细胞有促进增殖,加速细胞周期,抑制凋亡的作用。3. HBx对HepG2细胞有抑制增殖,阻滞细胞周期于S期并促进凋亡的作用。4.HBx可能通过参与激活L02细胞中的Wnt信号通路,使GSK3β发生磷酸化,抑制GSK3β的活性,引起β-catenin的积聚,从而激活下游相关转录基因,促进细胞的增殖。5.HBx可以促进HepG2细胞中GSK3β蛋白的表达,可能参与其它信号通路诱导细胞的凋亡。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-15
  参考文献  13-15
第一部分 HBx 稳定细胞株L02 与HepG2 的构建及鉴定  15-26
  1 实验材料  15-17
  2 实验方法  17-22
  3 实验结果  22-23
  4 讨论  23-26
第二部分 HBx 对L02 与HepG2 细胞增殖、凋亡及GSK3β表达的影响  26-38
  1 实验材料  26-27
  2 实验方法  27-30
  3 实验结果  30-35
  4 讨论  35-38
参考文献  38-42
全文总结  42-43
文献综述  43-51
  参考文献  48-51
致谢  51-52
硕士期间发表论文情况  52

相似论文

  1. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  2. 塞来昔布与β-榄香烯联合给药的抗肿瘤作用及其机制研究,R96
  3. 恩替卡韦联合TACE治疗伴乙肝病毒复制的原发性肝癌效果分析,R735.7
  4. 核蛋白NDP52与肿瘤坏死因子受体相关因子TRAF6相互作用及临床意义的研究,R363
  5. MCFP对肝癌细胞生物行为学影响初步研究,R735.7
  6. Toll样受体4信号通路在脂多糖促进肺癌细胞增殖中的机制探讨,R734.2
  7. hnRNP A2/B1及p21WAF1蛋白在非小细胞肺癌中表达及意义,R734.2
  8. 榄香烯体内外抑制小鼠肝癌H22细胞增殖与诱导凋亡作用的研究,R735.7
  9. 新城疫病毒治疗中晚期肝恶性肿瘤临床观察,R735.7
  10. 明胶海绵微粒化疗栓塞肝癌疗效的双源CT灌注成像评估,R735.7
  11. 蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926增殖和诱导凋亡的研究,R285
  12. pIRES2-EGFP-hIL-12-HSP70真核表达载体的构建及对7402肝癌细胞生长的影响,R346
  13. 虎纹捕鸟蛛粗毒对人结肠癌SW480细胞体外增殖的影响,R735.35
  14. CLIC1基因对小鼠肝癌淋巴道转移影响的研究,R735.7
  15. SNCG的表达和定位及其在肝癌高低淋巴道转移细胞株中的差异,R735.7
  16. 奥曲肽温敏凝胶对Hca-F细胞增殖及凋亡的影响及其在实体瘤内滞留时间的研究,R735.7
  17. 体外联合化疗对HepG2人肝癌细胞株CD90/CD44表达的影响及意义研究,R735.7
  18. 肝癌中Mena蛋白的表达及其临床意义,R735.7
  19. L-4-硝基苯丙氨酸等5种氨基酸衍生物的生物学作用研究,R96
  20. HBx转染小鼠细胞因子的表达及GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核表达载体的构建与表达,Q78
  21. GSK3β在CGNs内质网应激反应中的作用研究,R363

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com