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肝癌细胞系中多基因启动子区域异常甲基化状态及逆转的研究

作　者: 李培坤
导　师: 耿小平；朱立新
学　校: 安徽医科大学
专　业: 外科学
关键词: 癌肝细胞 DNA甲基化基因逆转
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 36次
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内容摘要

目的了解5种人肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞系SUN449,BEL-7402,SMMC-7721,Hep3B和HepG2中,SLIT2,DAPK,RIZ1,CHFR,EDNRB和3-OST-2等6种基因启动子区域甲基化状况,探讨去甲基化药物5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对5种肝癌细胞系中SLIT2基因甲基化状态和基因表达的影响。方法复苏并培养以上5种肝癌细胞系,应用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)技术,检测5种肝癌细胞系中SLIT2,DAPK,RIZ1,CHFR,EDNRB和3-OST-2等6种基因启动子区域的甲基化状况;用不同浓度的5-Aza-CdR处理以上5种细胞后,MSP方法检测SLIT2基因甲基化状态的变化,RT-PCR方法检测处理前后SLIT2 mRNA表达水平的差异。结果SLIT2,RIZ1,EDNRB和3-OST-2等4种基因启动子区域在5种肝癌细胞系SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B和HepG2中为完全甲基化,甲基化率均为100%;DAPK基因在此5种肝癌细胞系中为完全非甲基化,未发现甲基化状态,甲基化率为0%; CHFR基因启动子区在SUN449、BEL-7402、SMMC-7721和HepG2细胞系中发生甲基化,甲基化率为80%,在SUN449、SMMC-7721和HepG2中为不完全甲基化,在BEL-7402细胞系中为完全甲基化,在Hep3B中为完全非甲基化。用浓度为1mmol/L,5mmol/L,10mmol/L,20 mmol/L的5-Aza-CdR处理后,以上5种细胞系SLIT2基因均出现非甲基化条带,异常高甲基化得到部分逆转;且用5-Aza-CdR处理后,各细胞系中SLIT2 mRNA表达水平较处理前显著增加(P<0.05)。结论肝癌细胞系中SLIT2, RIZ1, CHFR, EDNRB和3-OST-2等5种基因启动子区的高甲基化是普遍现象,是肝癌细胞系中的频发事件,可能参与肝细胞癌的发生与发展;而DAPK基因呈低甲基化水平,可能不是肝细胞癌发生的主要机制;甲基化抑制剂5-Aza-CdR能使SLIT2基因异常高甲基化状态得到部分逆转,使SLIT2基因转录上调,为其应用于肝癌去甲基化治疗提供了实验依据。

全文目录

英文缩略词对照表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
引言  10-19
材料与方法  19-31
结果  31-38
讨论  38-46
结论  46-47
参考文献  47-56
附录  56-58
致谢  58-59
综述  59-70
  参考文献  68-70

肝癌细胞系中多基因启动子区域异常甲基化状态及逆转的研究

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