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缺氧对胎羊肝细胞发育及其RAS机制的影响

作 者: 姜姗
导 师: 徐智策;茅彩萍
学 校: 苏州大学
专 业: 胚胎生理与围产基础医学
关键词: 缺氧 胎羊肝细胞 细胞培养与鉴定 肝细胞功能 细胞周期 凋亡 AngⅡ AT1R AT2R 蛋白表达
分类号: R363
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:研究缺氧对胎羊肝细胞发育的影响。方法:采用脐静脉胶原酶灌注法和Percoll密度梯度离心法分离胎羊肝细胞并原代培养,建立肝细胞缺氧损伤模型,即为缺氧组,以原代正常培养的肝细胞为对照组,电镜下观察细胞超微结构的改变,用全自动生化分析仪检测细胞培养液中总蛋白(Total protein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)、肌酐(Creatinine,CREA)、尿素氮(Urea nitrogen,BUN)、天冬氨酸转氨酶(Aspartate transferase,AST)、丙氨酸转氨酶(Alanine transaminase,ALT)、乳酸脱氢酶(Lactic acid dehydrogenase,LDH)的浓度,用流式细胞仪检测肝细胞的细胞周期凋亡的变化。结果:肝细胞缺氧后电镜下可见胞质内空泡状改变,内质网扩张,线粒体肿胀变形,线粒体嵴肿胀断裂,细胞内可见退行性变;细胞培养上清液中TP、ALB浓度降低(p<0.05),AST、LDH浓度显著升高(p<0.01),处于S期的细胞比例降低(p<0.05),凋亡细胞比例升高,与对照组比较差异显著(p<0.05),但CREA、BUN及ALT浓度与对照组比较无明显改变。结论:缺氧可导致胎羊肝细胞超微结构发生一定程度的改变;肝细胞功能显著降低;肝细胞增殖减少而凋亡增多。第二部分缺氧对胎羊肝细胞RAS机制的影响目的:研究缺氧对胎羊肝细胞RAS机制的影响。方法:取正常培养3天(d)的肝细胞,随机分为六组,分别给予以下处理:1)正常对照组;2)对照+AngⅡ(血管紧张素Ⅱ)组;3)缺氧组;4)缺氧+AngⅡ组;5)Losartan+AngⅡ组;6)PD123319+AngⅡ组;(所加药物终浓度均为10-6mol/L)。用流式细胞仪检测肝细胞的细胞周期变化。取正常培养3d的肝细胞,随机分为四组:1)正常对照组;2)对照+AⅡ(10-6mol/L)组;3)缺氧组;4)缺氧+AⅡ(10-6mol/L)组。用流式细胞仪检测肝细胞凋亡比例,用Western blot检测肝细胞AT1RAT2R蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,处于S期的肝细胞比例在缺氧组、对照+AngⅡ组及缺氧+AngⅡ组均明显下降(p<0.05,p<0.01,p<0.01),而凋亡比例均明显上升(p<0.05);缺氧+AngⅡ组处于S期的肝细胞比例较之缺氧组明显下降(p<0.05)但与对照+AngⅡ组之间无显著差异(p>0.05),而其凋亡比例与缺氧组无明显差异(p>0.05),但较之对照+AngⅡ组明显上升(p<0.05);与正常对照组相比,处于S期的肝细胞比例在对照+AngⅡ及Losartan+AngⅡ组均明显下降(p<0.01),在PD123319+AngⅡ组无显著差异(p>0.05),与对照+AngⅡ组相比,处于S期的肝细胞比例在Losartan+AngⅡ组不明显差异(p>0.05)而在PD123319+AngⅡ组明显上升(p<0.05);AT1R蛋白表达在缺氧组及对照+AngⅡ组肝细胞中较之正常组均无显著改变(p>0.05),而AT2R蛋白在缺氧组肝细胞中较之正常组显著上调(p<0.05),对照+AngⅡ组肝细胞中较之正常组无明显改变(p>0.05)。结论:缺氧和AngⅡ刺激均可使胎羊肝细胞增殖减少而凋亡增多,且与肝细胞AT1受体无关而主要通过与AT2受体结合产生其抑制增殖和促凋亡效应。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
序言  10-14
  参考文献  12-14
第一部分 缺氧对胎羊肝细胞生长发育的影响  14-35
  一、材料与方法  14-22
  二、结果  22-28
  三、讨论  28-32
  参考文献  32-35
第二部分 缺氧对胎羊肝细胞RAS 机制的影响  35-50
  一、材料与方法  35-40
  二、结果  40-45
  三、讨论  45-47
  参考文献  47-50
综述:肝细胞体外培养技术研究进展  50-55
  参考文献  52-55
中英文对照缩略词表  55-57
攻读硕士研究生期间撰写的文章  57-58
致谢  58-59

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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