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桑寄生的成分分析及其抗白血病细胞活性部位的筛选研究

作　者: 张瑾
导　师: 周欣欣
学　校: 广州中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 桑寄生活性部位含药血清抗白血病药 MTT
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 67次
引　用: 1次
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内容摘要

白血病是造血组织恶性疾病,又称“血癌”。据世界卫生组织统计,全球每年约有30万新发病例。各地区白血病的发病率在各种肿瘤中占第六位,是35岁以下发病率最高的恶性肿瘤。白血病患者的骨髓、肝、脾、等造血器官中白血病细胞的恶性增生,严重影响造血组织、皮肤粘膜、心包膜、脾、胃及中枢神经系统等,引起不同程度的出血、贫血、感染发热,威胁人们的身体健康和生命安全。目前用于治疗白血病的方法主要为化学治疗、放射治疗、标靶治疗以及中药治疗等。前三种治疗方法主要依靠化学药物,虽然能够快速杀灭癌细胞,针对性强,作用明显,但是毒副作用大、耐药性高,会降低机体的免疫力,给患者带来较严重的身体损害及沉重的经济负担。我国中药资源丰富,中药治疗白血病主要通过某些中药及其有效成分能够抑制白血病细胞增殖、诱导白血病细胞分化及诱导白血病细胞凋亡来达到疗效,并且能减轻化疗过程中的毒副作用,消灭体内残存的白血病细胞,对于疾病的复发起到预防作用。因此,研究开发疗效确切,毒副作用小,治疗成本较低的中药,是提高白血病治疗的重要途径。研究目的本课题研究的是寄生在木麻黄树上的桑寄生。桑寄生是一种寄生植物,由于寄主不同,化学成分及药理活性会随寄主变化,治疗不同的病症。据临床个案观察,煎服寄生在木麻黄树上的桑寄生单味药,能减轻小儿白血病的发热症状,缓解病情,但是未见有相关的实验研究报道。为了探讨此特殊品种的桑寄生是否对治疗白血病有疗效,进一步丰富桑寄生药用植物资源,本课题采用将中药化学、分析化学、中药血清药理学、细胞生物学等多学科交叉的方法,初步筛选出桑寄生对抗白血病细胞有疗效的活性部位,为阐述桑寄生治疗白血病的物质基础提供科学依据。研究方法本课题首次对寄生在木麻黄树上的桑寄生的化学成分定性鉴别研究：采用粉末显微鉴别、制备薄层层析法以及理化显色反应,对寄生在木麻黄树上的桑寄生的化学成分定性鉴别研究。桑寄生含药血清实验：将桑寄生水煎液、阿糖胞苷、清毒片与空白血清比较,分别作用于家兔,分离出含药血清,应用MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法与细胞形态学相结合,考察含药血清对白血病细胞K562与HL60增殖24,48,72h的影响。桑寄生活性部位初筛实验：根据化学成分预实验结果,以95%乙醇和水作为提取溶剂,按照极性由小到大,将醇提物依次用石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,将得到的萃取物作用于白血病细胞K562与HL60,应用MTT比色法,结合细胞形态学筛选出桑寄生抗白血病细胞K562与HL60的活性部位。活性部位定性定量鉴别实验：通过理化显色反应、紫外分光光度仪对桑寄生活性部位定性定量研究。研究结果①桑寄生粉末显微鉴别表明：标准中药材桑寄生和寄生在木麻黄树上的桑寄生粉末显微特征相似,只是木纤维长度和直径略有差异。②薄层定性鉴别研究显示：标准中药材桑寄生与寄生在木麻黄树上的桑寄生在展开剂条件为：甲苯：甲酸甲酯：甲酸(15：13：3),在紫外光365nm处观察,与对照品槲皮素在相同位置有相同颜色的斑点,并且在相同的处理条件下,两种中药材的其它斑点无明显差异。③桑寄生化学成分预实验结果表明桑寄生药材中可能含有：氨基酸、肽、有机酸、酚类化合物和鞣质、甾体和三萜类化合物、黄酮、皂苷、挥发油等成分。④含药血清实验提示：随着作用时间的延长与药物浓度的加大,阿糖胞苷阳性对照组明显抑制两种细胞增殖,细胞胀大明显；清毒片组对两种细胞也有抑制作用；桑寄生高剂量组在对两种细胞作用72h后,均有微弱的抑制作用,值得进一步深入研究。⑤桑寄生不同萃取部位对白血病细胞K562与HL60增殖影响表明：随着作用时间的延长,药物浓度的增加,桑寄生乙醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位对K562细胞的增殖抑制作用明显,当作用时间为72h时,乙醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位对K562细胞的半数抑制浓度依次为：(193.39±14.45)μg/ml.(83.23±2.79)μg/ml (110.94±1.37)μg/ml；桑寄生乙酸乙酯部位对白血病细胞HL60抑制作用较强,其它部位抑制作用不明显,当作用时间为72h时,乙酸乙酯部位对HL60细胞的半数抑制浓度为：(155.44±7.50)μg/ml。细胞形态学考察结果表明,药物作用72h后,给药组细胞明显皱缩,增殖受到抑制,形态不一,核大、松散、核仁减小,细胞碎片较多。⑥活性部位定性定量研究表明：乙醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位主要为黄酮类化合物；通过紫外分光光度仪定量检测得：寄生在木麻黄树上的桑寄生和标准中药材桑寄生总黄酮的含量分别为：10.08mg/g和17.05mg/g.平均回收率分别为：97.92%和99.81%,RSD分别为：2.56%和3.07%。两种不同品种的桑寄生总黄酮含量存在少许差异,所建立的紫外分光光度法简便易行、结果稳定可靠,可用于桑寄生总黄酮的含量测定。研究结论结果表明寄生在木麻黄树上的桑寄生与标准中药材桑寄生化学性质区别不大,含量略有差异,可互相替代应用。寄生在木麻黄树上的桑寄生的乙醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位对白血病细胞增殖抑制作用明显,主要为黄酮类化合物。提示桑寄生的黄酮类化合物对白血病有一定的防治效果。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-11
引言  11-13
第一章文献研究  13-25
  第一节白血病的研究概述  13-17
    1 病因病机  13
    2 分型  13-14
    3 治疗  14-16
    4 小结  16-17
  第二节中医药治疗白血病的研究进展  17-21
    1 病因病机  17
    2 辨证分型  17
    3 中医药治疗  17-18
    4 中医药抗白血病的机制研究  18-19
    5 其它  19-20
    6 小结  20-21
  第三节桑寄生药材的研究概况  21-25
    1 本草考证  21-22
    2 生药学研究  22
    3 化学成分研究  22-23
    4 药理作用  23-24
    5 临床应用  24-25
第二章中药材桑寄生定性鉴别研究  25-37
  第一节桑寄生药材的生药学研究  25-31
    1 药材的原植物来源  25
    2 药材的性状鉴别  25
    3 显微鉴别  25-29
    4 讨论  29-31
  第二节桑寄生药材的薄层色谱鉴别  31-33
    1 实验材料和仪器  31
    2 实验方法  31
    3 结果  31-32
    4 讨论  32-33
  第三节桑寄生药材化学成分系统预实验  33-37
    1 实验材料与仪器  33
    2 实验方法与结果  33-35
    3 实验结果  35-36
    4 讨论  36-37
第三章桑寄生含药血清实验  37-44
  1 材料  37
  2 方法  37-38
  3 结果  38-42
  4 讨论  42-44
第四章桑寄生不同萃取物对抗白血病细胞株K562、HL60筛选研究  44-56
  1 材料  44
  2 方法  44-46
  3 结果  46-54
  4 讨论  54-56
第五章桑寄生对抗白血病细胞株K562、HL60活性部位定性定量研究  56-62
  1 材料  56
  2 方法与结果  56-60
  3 讨论  60-62
第六章结语与展望  62-66
  1 结论  62-63
  2 讨论  63-64
  3 展望  64-66
参考文献  66-72
附录  72-75
致谢  75

桑寄生的成分分析及其抗白血病细胞活性部位的筛选研究

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