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血塞通注射液对大鼠脑梗死后不同恢复时间点Nogo-A受体NGR、p75表达的影响
作 者: 魏小琴
导 师: 朱陵群
学 校: 北京中医药大学
专 业: 中西医结合临床
关键词: MCAO 脑梗死 NGR p75 Real-time PCR western blot 血塞通
分类号: R285
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的采用MCAO造模方法,建立大鼠脑梗死模型,观察血塞通注射液对MCAO大鼠术后不同恢复时间点神经功能学评分、神经生长抑制因子Nogo-A受体NGR、p75蛋白及mRNA表达的影响,从蛋白水平、基因水平探讨血塞通在脑梗死恢复期对大脑功能重塑、重建的作用机制。方法成年健康雄性SD大鼠,体重300±20g。大鼠随机分为手术组和非手术组(正常组)。手术组大鼠采用改良Zea-Longa方法制备MCAO模型,且根据醒后2小时Longa评分将纳入标准者随机分为模型组--生理盐水组、血塞通小剂量组(3.6mg/100g.d)、血塞通大剂量组(7.2mg/100g.d)、阳性对照组--尼莫地平组(1.44mg/100g.d)。各组动物均从手术当日起术后5小时开始给药,并于术后7d、14d和28d对其进行神经功能学评分。各组分别于术后7d、14d和28d断头处死,取视交叉前后2mm脑组织常规脱水浸蜡包埋后,行4um厚度连续冠状切片,制作石蜡切片;迅速取梗死侧大脑皮层约200mg左后,分两管置于液氮罐中保存,最后通过免疫组织化学法、Western Blot方法、Real-time PCR方法观察各组Nogo-A受体NCR、p75表达变化。结果1大鼠MCAO模型的制备及神经功能学评分本实验对MCAO术后不同时间点-术后7天、14天、28天的神经功能学评分进行了评价。正常组无神经功能缺损症状,评分均为0分;术后各时间点模型组评分均显著高于正常组(p<0.01或p<0.05)。各手术组神经功能学评分随着时间延长而逐渐降低,与同时间点模型组相比较,各用药组降低趋势更明显,尤其是血塞通大剂量组和尼莫地平组。体重指数是一种评价造模后大鼠整体健康状况的检测指标。分别于术前、术后7天、14天、28天秤取并记录大鼠体重,以术前体重为基础值,体重指数即为各时间点体重与基础值之比。结果显示:术后各组动物体重指数均呈现先减轻后逐渐回升的趋势,且各给药组体重恢复更快更明显。2血塞通注射液对MCAO大鼠术后不同恢复时间点Nogo-A受体NGR、p75蛋白表达的影响(免疫组化法)本实验通过免疫组织化学法检测血塞通注射液制剂对大鼠脑梗死后不同时间点(术后7天、14天、28天)、不同区域(脑梗死中心区、梗死周边区、梗死对侧正常区)Nogo-A受体NCR、p75的变化规律,结果显示:在梗死中心区,随着缺血时间的延长,NGR、p75表达逐渐降低,血塞通组和尼莫地平组NCR、p75的表达均高于同时间点模型组;在梗死周边区,模型组NCR、p75表达均较正常组显著升高,随着缺血时间延长NGR表达逐渐升高,28天达到高峰,而p75表达在14天达到高峰,28天略有降低,各用药组均较同时间点模型组降低;在梗死对侧正常区,模型组NCR、p75表达均较正常组高,给药组有所降低,但均未作出统计学差异。3血塞通注射液对MCAO大鼠术后不同恢复时间点Nogo-A及其受体NGR、p75蛋白表达的影响(western blot法)本实验采用western blot方法,从蛋白水平观察大鼠脑梗死后不同恢复时间点(7天、14天、28天)Nogo-A及其受体NGR、p75蛋白表达变化。结果显示:正常组不同时间点Nogo-A及其受体NGR、p75蛋白表达无差异;模型组Nogo-A及其受体p75蛋白表达在术后7天升高,到14天时达到高峰,28天有所下降,模型组NGR蛋白表达随着缺血时间延长而逐渐升高,到28天时达到高峰,各用药组Nogo-A及其受体NGR、p75蛋白表达均较模型组降低,且随着用药时间的延长逐渐降低,血塞通大剂量组较小剂量组降低作用更明显(P<0.05或P<0.01)。4血塞通注射液对MCAO大鼠术后不同恢复时间点Nogo-A受体NGR、p75mRNA表达的影响(Real-time PCR法)本实验通过实时荧光定量PCR (Real-time PCR)方法,从基因水平研究脑梗死后不同恢复时间点Nogo-A受体NGR、p75mRNA表达变化,结果显示:正常组不同时间点NGR和p75mRNA表达无显著差异;模型组NGRmRNA表达随着缺血时间延长而逐渐升高,到28天时达到高峰,模型组p75mRNA表达在术后7天升高,到14天时达到高峰,28天时有所下降,各用药组NGR和p75mRNA表达均较模型组降低,且随着用药时间的延长逐渐降低,血塞通大剂量组较小剂量组降低作用更明显(P<0.05)。结论1血塞通注射液可以减轻神经功能损伤,促进脑缺血后缺损神经功能的恢复;2血塞通注射液可以下调脑梗死后不同恢复时间点、梗死组织不同区域Nogo-A及其受体NGR、p75蛋白水平表达;3血塞通注射液可以下调脑梗死后不同恢复时间点Nogo-A受体NGR、p75mRNA水平表达;4血塞通注射液促进脑梗死后大脑功能重塑、重建中的作用机制可能为:下调Nogo-A受体NGR、p75蛋白、mRNA的表达。
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全文目录
摘要 4-6 Abstract 6-9 英文缩略词 9-10 前言 10-11 文献综述 11-23 综述一 三七制剂治疗缺血性脑血管病研究进展 11-16 参考文献 14-16 综述二 中枢神经再生抑制因子及其受体复合物研究进展 16-23 参考文献 19-23 实验研究 23-62 实验一 大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型的制备与评价 23-29 材料与方法 23-25 结果 25-26 讨论 26-27 参考文献 27-29 实验二 血塞通注射液对大鼠脑梗死后不同恢复时间点NOGO-A受体NGR、P75表达的影响 29-40 材料与方法 29-31 结果 31-37 讨论 37-38 参考文献 38-40 实验三 血塞通注射液对大鼠脑梗死后不同恢复时间点NOGO-A及其受体NGR、P75蛋白表达的影响 40-50 材料与方法 40-44 结果 44-47 讨论 47-48 参考文献 48-50 实验四 血塞通注射液对大鼠脑梗死后不同恢复时间点NOGO-A受体NGR、P75MRNA表达的影响 50-62 材料与方法 50-54 结果 54-59 讨论 59-60 参考文献 60-62 结论 62-63 附图 63-71 致谢 71-72 个人简历 72
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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