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抗猪囊尾蚴特异IgG4重组抗原的制备与鉴定

作　者: 王燕
导　师: 黄炳成
学　校: 济南大学
专　业: 病原生物学
关键词: 猪囊尾蚴 IgG4 重组抗原 Ts8B3
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

猪囊尾蚴病(以下简称囊虫病)是人兽共患寄生虫病,病原体为猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫猪囊尾蚴。囊虫病的危害程度,因寄生部位和数量而有所不同,其中以脑囊虫病危害最大。囊尾蚴病的有效诊断是控制该病的关键。然而,作为一种寄生于人、猪等脊椎动物体内的扁形动物门寄生虫,其抗原成分复杂,且与其他带科寄生虫抗原间存在广泛交叉性,因此,囊尾蚴有效诊断抗原的筛选工作难度大、任务繁重。从组织结构上来说,囊尾蚴抗原包括囊液抗原、囊壁抗原和头节抗原,且这些抗原随囊尾蚴的发育阶段不同而呈现出变化。另外,囊尾蚴在宿主体内生长发育过程中还会排泄分泌到其体外一些抗原成分,即排泄分泌抗原(excretary-secretary antigen,ES-Ag)。尽管如此,随着分子生物学的发展,囊尾蚴重组诊断抗原的研究仍是免疫诊断的热点。与囊尾蚴囊壁、头节相比,囊尾蚴囊液的糖蛋白和脂蛋白含量丰富,且其抗原特异性较高,抗原成分的pH值主要位于碱性区。另外,研究显示当人体感染猪囊尾蚴后,几乎所有患者血清中特异IgG4显著性升高,其含量约占总反应IgG抗体50%以上,因此检测囊虫病患者血清特异IgG4具有较好的敏感性,特别是IgG4为短程抗体,当患者体内的囊尾蚴被杀灭后,特异IgG4会较快的降低或消失,客服了检测总IgG不能进行疗效考核的不足。本实验利用收集到的囊尾蚴囊液抗原进行双向电泳和免疫印记,发现与IgG4抗体结合力较强的蛋白以碱性居多,以小分子量蛋白为主。经抗原筛选出51个抗原点,对抗原点进行质谱分析,找出24个阳性点。24个阳性点与12种囊虫蛋白密切相关,每个阳性点都有4到5个相关蛋白(分值大于等于39),其中最为密切相关的蛋白有4种。分别为Secreted antigen Ts8B3(16/24),Secreted antigen Ts8B2(18/24),Sequence 3 from patent US 6589752(15/24)和Cysticercosis 10kDa antigen(16/24)。选取其中排泄分泌抗原Ts8B3基因,并将成熟肽序列亚克隆到载体中,在大肠杆菌细胞中成功表达了重组融合蛋白。通过ELISA鉴定,重组Ts8B3抗原能很好的与IgG4结合。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
主要符号表  9-10
前言  10-13
第一部分双向电泳和免疫印记  13-25
  一、材料和方法  13-20
    （一）实验材料  13-17
    （二）实验方法  17-20
  二、实验结果  20-23
  三、讨论  23-25
第二部分质谱分析  25-31
  一、材料和方法  25-26
    （一）实验材料  25-26
    （二）实验方法  26
  二、结果  26-29
  三、讨论  29-31
第三部分 Secreted antigen Ts8B3 的克隆及表达  31-47
  一、材料和方法  31-40
    （一）实验材料  31-35
    （二）实验方法  35-40
  二、实验结果  40-45
  三、讨论  45-47
小结  47-48
参考文献  48-50
综述  50-59
  参考文献  56-59
攻读学位期间的研究成果  59-60
致谢  60

抗猪囊尾蚴特异IgG4重组抗原的制备与鉴定

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