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葡萄皮提取物抑制乳腺癌转移机制研究

作　者: 陈秋宇
导　师: 孙向军
学　校: 上海交通大学
专　业: 食品科学
关键词: 葡萄皮提取物乳腺癌转移抑制机制 4T1细胞细胞迁移
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

近年来乳腺癌的发病率呈逐渐增加的趋势,成为危害女性健康的头号杀手。原位乳腺癌并不致命,可以通过手术切除,结合放疗、化疗等手段治愈。然而,一旦乳腺癌发生转移,进入血液、淋巴、骨骼、肺、肝脏等器官,将会直接危及生命。研究发现,许多天然的植物萃取物具有抗癌功效,成为膳食营养和抗癌药物开发的新热点。葡萄皮提取物(GSKE)含有葡多酚、原花青素、白藜芦醇、没食子酸、齐墩果酸等多种活性成分,它具有来源广泛、生物活性高、无毒副作用等优点,可以作为膳食补充剂,在肿瘤的预防和治疗中具有很大的潜力。然而目前关于GSKE抗癌作用的研究主要集中于对肿瘤细胞生长和凋亡的影响,尚未见到GSKE对肿瘤细胞转移影响的报道。本文以天津尖峰天然产物研究开发有限公司提供的GSKE为研究对象,通过体外实验研究其对小鼠乳腺癌4T1细胞迁移的影响;并初步探讨相关分子机制。建立小鼠乳腺癌肺转移模型,研究GSKE在动物体内实验中对小鼠乳腺癌转移的影响。为GSKE作为膳食营养品及新型安全药物的开发利用提供了实验依据,也为通过膳食营养降低乳腺癌转移的风险提供了新的可能。主要研究结果如下:1.细胞迁移实验表明,GSKE对4T1细胞的迁移存在显著的抑制作用,该抑制作用与GSKE的浓度呈现剂量-效应关系。当GSKE浓度为20μg/ml时,完全抑制了4T1的迁移。2.MTT实验表明,GSKE对4T1细胞的增殖活性存在抑制作用,该抑制作用与GSKE的浓度呈现剂量-效应关系。GSKE的半数抑制浓度IC50为72.408μg/ml。细胞凋亡实验表明,GSKE能够诱导4T1细胞的凋亡。当GSKE浓度为20μg/ml时,GSKE对4T1细胞的增殖活性的抑制率为11.37%;4T1细胞的总凋亡率增加11.89%。而此浓度下GSKE完全抑制了4T1的迁移,可见GSKE对4T1细胞迁移的抑制作用不是由于其抑制4T1细胞的增殖活性或者诱导4T1细胞的凋亡而引起的。3.Western blot结果表明,经GSKE处理后,4T1细胞中Akt,PDK1,ERK1/2,p38四种信号分子的总蛋白量保持稳定;而其磷酸蛋白的表达量降低,降低趋势与GSKE浓度呈现剂量-效应关系。这些结果表明,GSKE抑制了PI3K/Akt和MAPK信号通路中相关信号分子的活化,从而阻断了4T1细胞信号转导PI3K/Akt和MAPK通路,由此抑制了4T1细胞的迁移。4.动物实验结果表明,在BALB/c小鼠乳腺癌肺转移模型中,在饮水中补给适当浓度的GSKE可以抑制4T1细胞在动物体内的转移。当GSKE浓度为0.5mg/ml时,荷瘤BALB/c小鼠肺转移率和转移结节数目显著降低,存活时间明显延长。然而,随着饮水中GSKE浓度的增加,其对乳腺癌转移的抑制效果降低。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
第一章绪论  11-25
  1.1 乳腺癌简介  11-13
    1.1.1 乳腺癌概述及现状  11-12
    1.1.2 乳腺癌的治疗方法  12-13
  1.2 肿瘤转移  13-19
    1.2.1 肿瘤转移概述  13
    1.2.2 肿瘤转移基本步骤  13-15
    1.2.3 肿瘤转移学说  15-16
    1.2.4 肿瘤转移与细胞信号转导  16-19
  1.3 葡萄皮提取物  19-23
    1.3.1 葡萄皮提取物概述  19-21
    1.3.2 葡萄皮提取物抗癌研究进展  21-23
  1.4 4T1 细胞简介  23-24
  1.5 本课题的研究内容及研究意义  24-25
第二章 GSKE 对4T1 细胞迁移的抑制作用  25-34
  2.1 引言  25
  2.2 材料与试剂  25-26
    2.2.1 细胞株  25
    2.2.2 主要材料及试剂  25-26
    2.2.3 主要仪器  26
    2.2.4 常用试剂配制  26
  2.3 实验方法  26-29
    2.3.1 细胞培养方法  26-27
    2.3.2 细胞生长曲线的建立  27-28
    2.3.3 细胞迁移实验  28-29
  2.4 结果与分析  29-32
    2.4.1 4T1 细胞生长曲线  29-31
    2.4.2 GSKE 抑制4T1 细胞迁移  31-32
  2.5 本章小结  32-34
第三章 GSKE 抑制4T1 细胞迁移机制研究  34-49
  3.1 引言  34
  3.2 试剂与仪器  34-36
    3.2.1 主要试剂  34-35
    3.2.2 主要仪器  35
    3.2.3 常用溶液配制  35-36
  3.3 实验方法  36-43
    3.3.1 MTT 法检测细胞增殖活力  36-37
    3.3.2 细胞凋亡实验  37-38
    3.3.3 Western blot  38-43
  3.4 结果与分析  43-48
    3.4.1 GSKE 抑制4T1 细胞增殖活性  43-44
    3.4.2 GSKE 诱导4T1 细胞凋亡  44-45
    3.4.3 GSKE 阻断 PI3K/Akt 和 MAPK 信号通路  45-48
  3.5 本章小结  48-49
第四章体内实验中GSKE 对乳腺癌转移的影响  49-59
  4.1 引言  49
  4.2 材料与仪器  49-50
    4.2.1 实验动物  49
    4.2.2 试剂与仪器  49-50
  4.3 动物实验方法  50-52
    4.3.1 小鼠乳腺癌转移模型的建立  50-51
    4.3.2 GSKE 在体内对乳腺癌转移的影响  51
    4.3.3 石蜡切片HE 染色  51-52
  4.4 结果与分析  52-58
    4.4.1 BALB/c 小鼠乳腺癌转移模型  52-53
    4.4.2 GSKE 抑制小鼠体内乳腺癌的转移  53-58
  4.5 本章小结  58-59
第五章结论与展望  59-61
  5.1 结论  59-60
  5.2 展望  60-61
参考文献  61-69
致谢  69-70
攻读硕士学位期间发表的论文  70-72

葡萄皮提取物抑制乳腺癌转移机制研究

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