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CD131在急性髓系白血病细胞的表达及其功能研究

作　者: 杨景辉
导　师: 陈元仲；吴勇
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科
关键词: CD131 急性髓系白血病慢病毒NB4细胞 CD11b 分化增殖
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:1.检测急性髓系白血病细胞CD131表达情况,了解急性髓系白血病细胞CD131表达有无异常;2.以NB4细胞为靶细胞,用慢病毒介导的基因转移方法,使NB4细胞过表达野生型CD131,观察过表达野生型CD131的NB4细胞在IL-3、GM-CSF作用下增殖分化行为的改变,探讨CD131与白血病细胞生物学行为之间的关系。方法:1.收集44例急性髓系白血病初治病人外周血单个核细胞,以24例正常人外周血单个核细胞为对照,RT-PCR比较CD131在急性髓系白血病病人及正常人外周血单个核细胞的表达水平,同时选取15例病人及5例正常人,PCR扩增CD131全长编码序列,连接到pGEM-T载体,转化Top10感受态细胞,筛选阳性克隆,序列分析检测急性髓系白血病细胞CD131编码序列的突变情况。2.以正常人外周血单个核细胞cDNA为模板,用带PmeI和BstBI酶切位点的引物PCR扩增CD131编码序列,酶切后定向克隆至慢病毒载体pRRLSIN.cPPT.PGK/ IRES/GFP.WPRE,构建含野生型CD131基因的慢病毒载体,经酶切及测序鉴定其正确性,将构建好的载体质粒与包装质粒一起共转染293T细胞,收集培养液上清,感染低表达野生型CD131的NB4细胞,Western Blot鉴定目的基因的表达情况。3.将过表达野生型CD131的细胞(NB4-CD131细胞)分为四组:分别加入全反式维甲酸(终浓度为1μM)、GM-CSF(终浓度为10ng/ml)、IL-3(终浓度为10ng/ml)及等体积培养。以转染空载体的NB4细胞(NB4-Blank)为阴性对照,。细胞计数法比较各组细胞增殖情况,流式细胞仪分析比较各组细胞CD11b表达情况,瑞氏染色显微镜下观察各组细胞形态学改变。结果:1.RT-PCR显示44例急性髓系白血病病例和24例正常人外周血单个核细胞CD131平均相对灰度值分别为0.187±0.130和0.438±0.127,AML组的CD131表达水平显著低于正常对照组(P值<0.001);141个来自AML病例的CD131全长编码序列,有104个发生突变,突变率为73.8%,49个来自正常人的CD131编码序列突变率为20.4%,AML组的CD131的突变率显著高于正常对照组(P值<0.001);2.重组CD131基因的慢病毒可有效感染NB4细胞,并使NB4细胞过表达CD131。过表达CD131的NB4细胞,在GM-CSF、IL-3、RA的作用下,CD11b表达上调,但上调的幅度以RA组为明显,且NB4-CD131细胞在GM-CSF或IL-3作用下并未观察到形态学改变。同时过表达CD131的NB4细胞增殖无改变,在IL-3或GM-CSF刺激下增殖也无改变。结论:1.CD131在部分急性髓系白血病细胞中表达水平低且突变率高;2. IL-3、GM-CSF能一定程度上诱导过表达野生型CD131的NB4细胞向中性粒细胞早期分化,但对增殖无影响,也不足以促使过表达野生型CD131的NB4细胞完全分化成熟。

全文目录

常用英汉缩略词  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分 CD131 在急性髓系白血病中的表达  11-24
  材料与方法  11-17
  结果  17-22
  讨论  22-24
第二部分 CD131 在NB4 细胞中的过表达及其与N84 细胞增殖分化的关系  24-38
  材料与方法  24-29
  结果  29-36
  讨论  36-38
结论  38-39
参考文献  39-42
致谢  42-43
综述  43-50
  参考文献  47-50

CD131在急性髓系白血病细胞的表达及其功能研究

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