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北虫草菌株诱变选育、固体栽培条件优化及粗多糖活性研究

作　者: 杨东生
导　师: 张玉静
学　校: 吉林大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 北虫草诱变固体栽培粗多糖细胞活性
分类号: S567.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

北虫草是冬虫夏草理想的替代品,它的大规模培养成为了人们关注的焦点。本文利用亚硝基胍诱变筛选高产突变株,优化固体栽培条件,并对子实体粗多糖体外细胞活性进行比较研究。本实验利用期望函数将北虫草生长周期、子实体产量、子实体中多糖、腺苷、甘露醇、蛋白的产量综合为一个考察指标——期望值D,利用D值对亚硝基胍诱变的突变株进行筛选,获得了稳定遗传的高产诱变菌株N165。采用Plackett- Burman、Box-Behnken设计实验及响应面分析对北虫草固体栽培培养基优化,在获得最佳培养基的基础上,并考察不同pH值、培养温度、培养湿度、光照条件和植物激素对期望值D的影响,从而提高诱变菌株的D值。最后考察蛹虫草诱变菌株N165和原始菌株子实体多糖对Hela、HepG-2和A549细胞增值的抑制作用。

全文目录

内容提要  4-8
第1章前言  8-20
  1.1 北虫草的生物学特性  8-10
    1.1.1 北虫草生活史  8
    1.1.2 北虫草的分布  8-9
    1.1.3 北虫草的寄主  9
    1.1.4 北虫草的生物活性物质  9-10
  1.2 诱变育种  10-13
    1.2.1 自然突变  10
    1.2.2 物理诱变  10-11
    1.2.3 化学诱变  11-13
    1.2.4 复合诱变  13
  1.3 北虫草的人工培养  13-15
    1.3.1 北虫草的半人工培养  13-14
    1.3.2 北虫草的液体培养  14-15
    1.3.3 北虫草的固体培养  15
  1.4 虫草属多糖生物活性的研究进展  15-18
    1.4.1 毒理学活性  15-16
    1.4.2 抗肿瘤活性  16
    1.4.3 免疫活性  16-17
    1.4.4 保肝作用  17
    1.4.5 降血糖作用  17-18
    1.4.6 抗氧化延缓衰老活性  18
    1.4.7 其他活性  18
  1.5 立题意义  18-19
  1.6 研究内容  19-20
第2章北虫草菌株的诱变选育  20-33
  2.1 引言  20
  2.2 材料与仪器  20-22
    2.2.1 仪器设备  20-21
    2.2.2 材料与试剂  21-22
    2.2.3 菌株与培养基  22
    2.2.4 溶液配制  22
  2.3 实验方法  22-26
    2.3.1 北虫草斜面培养  22
    2.3.2 北虫草孢子的培养  22-23
    2.3.3 北虫草摇瓶培养  23
    2.3.4 亚硝基胍（NTG）诱变及致死率测定  23
    2.3.5 诱变菌株筛选  23
    2.3.6 子实体培养  23
    2.3.7 遗传稳定性考察  23-24
    2.3.8 期望值D 的计算  24-26
  2.4 结果与分析  26-32
    2.4.1 亚硝基胍（NTG）诱变及致死率测定  26-27
    2.4.2 各指标标准曲线  27-29
    2.4.3 北虫草诱变菌株的筛选  29-30
    2.4.4 北虫草诱变菌株遗传稳定性考察  30-32
  2.5 本章小结  32-33
第3章北虫草诱变菌株固体栽培条件的优化  33-49
  3.1 引言  33
  3.2 材料与仪器  33-35
    3.2.1 仪器设备  33-34
    3.2.2 材料与试剂  34-35
    3.2.3 菌株与培养基  35
  3.3 实验方法  35-38
    3.3.1 期望值D 的计算  35
    3.3.2 北虫草诱变菌株固体栽培培养基优化  35-37
    3.3.3 北虫草诱变菌株固体栽培条件优化  37-38
  3.4 结果与分析  38-46
    3.4.1 北虫草诱变菌株固体栽培培养基组分优化  38-44
    3.4.2 北虫草诱变菌株固体栽培条件优化  44-46
  3.5 本章小结  46-49
第4章北虫草子实体粗多糖生物活性的比较研究  49-62
  4.1 引言  49
  4.2 材料与仪器  49-51
    4.2.1 仪器设备  49-50
    4.2.2 材料与试剂  50-51
    4.2.3 菌株与培养基  51
    4.2.4 溶液配制  51
  4.3 实验方法  51-53
    4.3.1 北虫草子实体粗多糖的制备  51-52
    4.3.2 北虫草子实体粗多糖对癌细胞增殖的影响  52-53
  4.4 结果与分析  53-59
    4.4.1 粗多糖对人宫颈癌Hela 细胞体外增殖的影响  53-55
    4.4.2 粗多糖对人肝癌HepG-2 细胞体外增殖的影响  55-57
    4.4.3 粗多糖对肺癌A549 细胞体外增殖的影响  57-59
  4.5 本章小结  59-62
第5章成果与展望  62-64
  5.1 本文的主要研究成果  62-63
  5.2 后续研究展望  63-64
参考文献  64-69
攻读硕士期间发表论文  69-70
致谢  70-71
中文摘要  71-73
Abstract  73-74

北虫草菌株诱变选育、固体栽培条件优化及粗多糖活性研究

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