学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

铝致痴呆模型中Caspase-3基因的干预研究

作　者: 李娜
导　师: 牛侨；张勤丽
学　校: 山西医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: RNAi Caspase-3基因神经细胞凋亡细胞死亡方式
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 62次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的通过运用RNA干扰技术下调铝致痴呆模型小鼠体内Caspase-3基因的表达水平,研究RNA干扰对铝神经毒性作用的影响及对神经元其他死亡方式的影响。方法取健康3月龄雄性昆明小鼠48只,体重g,随机分为6组,每组8只,分别为:空白对照组、假手术组、生理盐水组(生理盐水4μl)、染铝组(0.5%AlCl3 3μl+生理盐水1μl)、Al+阴性对照组(0.5% AlCl3 3μl和对照siRNA表达载体1μl)和Al+RNAi组(0.5%三氯化铝3μl和caspase-3 siRNA表达载体1μl),采用侧脑室注射方法染毒,连续染毒5天,染毒期结束后第15天进行跳台实验、旷场实验和Morris水迷宫实验,测定动物的学习记忆能力,第20天处死小鼠,取脑,切取一半大脑浸泡在10%福尔马林中固定24h,做病理切片,并观察转染效率,进一步做HE染色、硫堇染色;另一半大脑分离出海马做电镜,用流式细胞仪测定凋亡率和线粒体膜电位,大脑皮质置于EP管中,-80℃保存。用Western-blot法检测AD相关蛋白:Tau、APP、Aβ,凋亡相关蛋白:Bax、Bcl-2、NF-κB、Caspase-3及活化的Caspase-3 ,自吞噬相关蛋白LC3-Ⅱ及坏死状凋亡相关蛋白RIP1的表达水平,用QRT-PCR检测APP、Bax、Bcl-2、NF-κB、LC3-Ⅱ、Caspase-3及RIP1基因在小鼠脑内的表达。结果1、小鼠神经行为学测试:与空白对照组相比,假手术组和生理盐水组小鼠水迷宫的逃避潜伏期增加(P<0.05),其余指标均无显著差异(P>0.05);染铝组和Al+阴性对照组小鼠的各项指标较生理盐水组均有显著差异(P<0.05),Al+RNAi组小鼠无明显改变(P>0.05),但比染铝组小鼠的学习记忆能力显著增强(P<0.05)。2、转染效率及基因沉默效率结果:荧光镜下观察并计算caspase-3 siRNA转染神经细胞的转染效率大于90%,并且caspase-3基因的抑制效率为64.92%。3、各组小鼠海马凋亡率和线粒体膜电位检测结果均显示:假手术组的凋亡情况与空白对照组无显著差异(P>0.05),生理盐水组的凋亡现象较空白对照组多(P<0.05);染铝组和Al+阴性对照组凋亡现象较生理盐水组显著增加(P<0.05),而Al+RNAi组凋亡情况无显著差别(P>0.05),较染铝组显著减少(P<0.05)。4、HE染色、硫瑾染色、电镜结果均表明:空白对照组和假手术组小鼠海马CA3区情况相近,细胞无明显凋亡;生理盐水组在该区域出现轻微的病理改变,电镜结果无明显差异;染铝组和Al+阴性对照组病理改变明显,出现典型的凋亡形态;Al+RNAi组海马区细胞的上述病理改变得到修复,电镜结果与生理盐水组细胞形态较接近。5、相关蛋白的检测:凋亡相关基因、蛋白结果显示,染铝组和Al+阴性对照组较生理盐水组有显著差异(P<0.05),而Al+RNAi组较生理盐水组无明显变化(P>0.05),与染铝组的差异有统计学意义(P<0.05);AD相关蛋白、基因结果显示:染铝后导致APP、Aβ、Tau蛋白及相应基因表达显著增高,caspase-3 siRNA干扰后均显著减少(P<0.05);LC3-Ⅱ和RIP1基因、蛋白表达水平在染铝组、Al+阴性对照组表达较生理盐水组显著增高(P<0.05),Al+RNAi组则无显著差别(P>0.05),但比染铝组显著减少(P<0.05)。结论1、铝能够诱导体内神经细胞凋亡,产生神经毒性作用,caspase-3 siRNA在动物模型体内能够有效的阻断凋亡过程,从而在一定程度上减轻了铝的毒性作用,对AD等神经退行性疾病的治疗和干预有重要意义;2、以慢病毒为载体,并标记有GFP的caspase-3 siRNA通过侧脑室注射方法能有成功转染神经细胞;3、凋亡和坏死、自吞噬等死亡方式之间存在交互作用,实验结果提示凋亡的减少可能会抑制其他细胞死亡方式。

全文目录

中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
英文缩写  9-10
前言  10-13
第一节 RNA 干扰对不同处理组小鼠神经行为的影响  13-25
  1 材料与方法  13-16
  2 结果  16-20
  3 讨论  20-23
  参考文献  23-25
第二节 RNA 干扰的转染效率和CASPASE-3 基因沉默效率的检测  25-32
  1 材料与方法  25-27
  2 结果  27-29
  3 讨论  29-31
  参考文献  31-32
第三节 RNA 干扰对神经细胞凋亡率和线粒体膜电位改变的影响  32-41
  1 材料与方法  32-33
  2 结果  33-37
  3 讨论  37-40
  参考文献  40-41
第四节各组小鼠皮质和海马CA3 区的病理形态学改变  41-50
  1 材料与方法  41-43
  2 结果  43-46
  3 讨论  46-49
  参考文献  49-50
第五节相关基因和蛋白在不同处理组的表达  50-67
  1 材料与方法  50-53
  2 结果  53-61
  3 讨论  61-65
  参考文献  65-67
小结  67-68
综述  68-78
  参考文献  75-78
个人简历  78-79
致谢  79

铝致痴呆模型中Caspase-3基因的干预研究

内容摘要

全文目录

相似论文