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BMP-2基因修饰BMSCs复合nHAC/PLA材料体外构建组织工程骨的实验研究

作　者: 郭庆华
导　师: 李平
学　校: 山西医科大学
专　业: 骨外科
关键词: 骨形态发生蛋白骨组织工程骨缺损骨髓基质干细胞基因治疗
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的用携带骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因的慢病毒病毒载体转染SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),接种于纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)材料构建组织工程骨,体外观察成骨表达情况。方法体外分离、培养SD大鼠骨髓基质干细胞,传代培养后分为A、B、C组。A组为BMP-2和eGFP转染组;B组为空慢病毒病毒载体转染组;C组为未转染组。取携带BMP-2和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的慢病毒(MOI=25pfu/cell)感染SD大鼠BMSCs。荧光显微镜下观察eGFP的表达,判断感染效率及细胞生长情况。通过噻唑篮(MTT)和流式细胞仪(FCM)检测转染后细胞生长增殖活力及对细胞周期的影响。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化和酶联免疫吸附反应(ELISA)检测BMP-2蛋白的表达。转染成功后接种于nHAC/PLA支架,构建组织工程骨。碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测ALP活性,茜红素染色检了解成骨情况;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长和合成分泌骨基质的情况。结果①经密度梯度离心法分离、贴壁筛选、培养所获的细胞,经鉴定是鼠的BMSCs,并且能大量增殖。②慢病毒感染后BMSCs形态特征、细胞增殖情况及细胞周期与未转染组相比无显著变化。③基因转染后48h,RT-PCR、免疫组化和ELIASA都能检测到BMP-2基因的转录及表达,而空载体转染组及未转染组未见其转录及表达,差异均有显著性意义(P<0.05)。④BMP-2转染的BMSCs具有成骨细胞的结构特征和生物学特性;转染后的BMSCs的ALP均较空转染组和未转染组有显著增高,差异均有显著性意义(P<0.05)。⑤BMP-2基因修饰的BMSCs在nHAC/PLA支架表面和孔隙内黏附、生长良好,仍可高水平表达BMP-2蛋白。结论①慢病毒携带BMP-2基因可有效感染SD大鼠BMSCs并使BMP-2获得稳定大量表达;②BMP-2基因转染后的BMSCs向成骨细胞方向分化加快,并具有具有典型成骨细胞的形态学特征和较强的生物学活性;③BMP-2基因修饰的BMSC在nHAC/PLA支架中黏附、生长良好,继续高水平表达并分泌BMP-2,组织工程骨构建获得初步成功;④nHAC/PLA是一种良好的骨组织工程的载体材料。

全文目录

缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
Abstract  7-9
前言  9-10
材料与方法  10-14
结果  14-17
讨论  17-22
结论  22-23
附图  23-29
参考文献  29-33
文献综述  33-43
  参考文献  39-43
个人简介  43-44
致谢  44

BMP-2基因修饰BMSCs复合nHAC/PLA材料体外构建组织工程骨的实验研究

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