学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

NCI-H716细胞作为甜味感受热力学模型细胞的研究

作　者: 牛敏
导　师: 邓少平
学　校: 浙江工商大学
专　业: 食品科学与工程
关键词: NCI-H716 等温滴定量热技术甜味感受甜味剂味蕾细胞
分类号: Q434
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 26次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

甜味感受是甜味剂分子刺激味蕾细胞而产生的一种复杂的物理、化学和生理过程,是人们最喜好且最感兴趣的一种基本味感,但是关于味细胞感受甜味的确切机理还尚在探索中。过去基于细胞水平的甜味感受机理研究方法主要包括钙影像和电生理。而近些年了发展起来的高灵敏度的等温量热滴定技术,为我们从热力学角度诠释甜味感受机制提供了新的思路。但是要实现细胞水平上甜味感受的热力学研究需要有稳定的表达甜味受体蛋白的细胞来源。基于本实验室前期建立的一种高效分离纯化小鼠Ⅱ型味蕾细胞方法,在数量上难于满足甜味感受热力学研究的需要,因此寻找一种可以替代味蕾细胞,并能满足甜味感受需求的模型细胞对于诠释甜味感受的热力学机制至关重要。立于此本研究寻找了一种味蕾细胞的替代细胞——NCI-H716,并从受体、信号转导因子及功能角度证明此种细胞具有感受甜味味蕾细胞的功能。进一步以NCI-H716细胞为实验对象,我们建立了甜味感受热力学研究的等温滴定微量实验条件及数据处理方法,最后初步用模型细胞进行甜味感受热力学研究,充分表明NCI-H716细胞可以作为甜味感受热力学研究的模型细胞。实验结果如下(1)NCI-H716细胞作为甜味感受味蕾细胞代替细胞的确定。通过免疫组化、免疫荧光和RT-PCR及钙影像技术,从甜味受体、下游信号传导及功能角度证明了NCI-H716作为味蕾细胞代替细胞的可行性。免疫及逆转录PCR结果表明该细胞表达了有用于甜味感受信号传导因子(G蛋白a-gustducin、磷脂酶C)及甜味感受蛋白(T1R2、T1R3),而钙影像实验结果表明,此细胞能够与甜味物质相互作用。(2)以NCI-H716细胞为实验对象,确定了甜味物质与细胞等温量热滴定条件及建立了实验数据处理方法。通过对缓冲液,温度以及正／反滴定条件的探讨,确定了适合NCI-H716细胞的甜味感觉微量热研究的实验参数：缓冲液,10 mM HEPEs;温度,310.15K；滴定模式,正向滴定模式。由于不能用等温滴定量热仪的自带软件对实验滴定结果进行分析,因此通过目前的实验建立了适合模型细胞甜味感觉微量热实验的数据处理方法,即扣除甜味剂稀释热和比较相互作用总热量方法。(3)利用NCI-7H16细胞进行甜味感受热力学的初步研究,包括对不同浓度的蔗糖溶液区分,与九种常见甜味剂相互作用的微量热实验,并且与味蕾细胞同甜味剂的热力学实验进行了比较。结果表明,NCI-7H16细胞能够良好区分不同浓度的蔗糖溶液；与味蕾细胞同甜味剂相互作用相比,NCI-7H16细胞可以获得更好的热力学曲线；而且与九种甜味剂相互作用区分较为明显,通过拟合获得相关热力学参数,有利于揭示甜味感受机理。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-11
第一章引言  11-28
  1.1 味觉感受生物学基础  11-24
    1.1.1 味觉外周感受器及味蕾细胞  11-13
    1.1.2 味觉受体  13-20
    1.1.3 味觉信号传导  20-22
    1.1.4 味蕾细胞分离及纯化  22-24
    1.1.5 可用于味觉研究的细胞  24
  1.2 味觉机理研究方法  24-26
    1.2.1 味觉机理研究方法  25
    1.2.2 等温滴定量热仪  25-26
  1.3 研究意义、内容及技术路线  26-28
    1.3.1 研究意义  26
    1.3.2 研究内容  26-27
    1.3.3 实验思路  27-28
第二章甜味感觉模型细胞的确定  28-47
  2.1 引言  28
  2.2 实验材料、仪器和主要试剂的配制  28-31
    2.2.1 实验材料  28-29
    2.2.2 实验仪器  29-30
    2.2.3 实验主要溶液的配制  30-31
  2.3 实验方法  31-40
    2.3.1 小鼠味蕾细胞的分离  31-32
    2.3.2 小鼠味蕾细胞的纯化  32-33
    2.3.3 NCI一H716与COL-205的细胞培养  33-35
    2.3.4 细胞活性的检测  35
    2.3.5 NCI-H716细胞的甜味受体的免疫荧光检测  35-36
    2.3.6 NCI-H716细胞的免疫组化实验  36-37
    2.3.7 NCI-H716细胞PT-PCR检测  37-39
    2.3.8 钙影像实验  39-40
    2.3.9 数据与图片处理  40
  2.4 结果与讨论  40-45
    2.4.1 小鼠味蕾细胞的纯化  40-41
    2.4.2 NCI-H716的细胞培养  41-42
    2.4.3 NCI-H716细胞甜味受体蛋白的免疫组化实验  42-44
    2.4.4 RT-PCR结果  44
    2.4.5 钙影像结果  44-45
  2.5 结论  45-47
第三章甜味感受模型细胞等温量热滴定条件及数据处理方法的建立  47-63
  3.1 实验材料、仪器和主要试剂的配制  47-49
    3.1.1 实验材料  47
    3.1.2 主要实验仪器  47-49
    3.1.3 主要试剂的配制  49
  3.3 实验方法  49-53
    3.3.1 等温滴定量热仪滴定参数的设置  49-50
    3.3.2 等温滴定量热仪基本实验方法及步骤  50-51
    3.3.3 缓冲剂的选择  51-52
    3.3.4 反应温度的选择  52
    3.3.5 正向滴定与反向滴定实验  52-53
  3.4 数据处理方法  53-55
    3.4.1 扣除糖溶液稀释热  54
    3.4.2 总反应热的比较  54-55
  3.5 结果与讨论  55-62
    3.5.1 缓冲剂的选择  55-57
    3.5.2 温度对反应的影响  57-60
    3.5.4 数据处理方法  60-62
  3.6 结论  62-63
第四章 NCI-H716模型细胞甜味感受热力学初步研究  63-72
  4.1 实验材料、仪器和主要试剂的配制  63-64
    4.1.1 主要仪器  63
    4.1.2 实验试剂  63
    4.1.3 试剂配制  63-64
  4.2 实验方法  64-65
    4.2.1 甜味剂的选择  64
    4.2.2 细胞悬液的制备  64-65
    4.2.3 实验参数的选择  65
  4.3 实验结果与讨论  65-71
    4.3.1 不同类型细胞与蔗糖的等温量热滴定结果  65-66
    4.3.2 NCI-H716细胞对不同浓度的同种甜味剂的区分  66-67
    4.3.3 模型细胞与九种常见甜味剂的微量热实验  67-71
  4.4 结论  71-72
第五章总结与展望  72-74
  5.1 总结  72
  5.2 展望  72-74
参考文献  74-82
致谢  82-84

NCI-H716细胞作为甜味感受热力学模型细胞的研究

内容摘要

全文目录

相似论文