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替米沙坦对高血压血管重塑的影响及其分子学机制

作　者: 叶佳颖
导　师: 钟久昌
学　校: 宁波大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 替米沙坦 高血压 血管重塑 血管紧张素转换酶2 前纤维蛋白-1
分类号: R544.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 65次
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内容摘要


目的:探讨替米沙坦对高血压大鼠血管组织以及体外培养的血管平滑肌细胞中血管紧张素转化酶2（ACE2）和前纤维蛋白-1（Profilin-1）表达的影响,并结合血管形态学和功能研究,以期了解替米沙坦在介导高血压血管纤维化、细胞外基质生成与血管肥厚重塑中的调控作用及其机制。方法:选择10周龄自发性高血压大鼠（SHR）及其同源对照WKY大鼠,给予替米沙坦(5或10 mg·kg-1·d-1)或安慰剂治疗,为期10周。尾套法测量大鼠尾动脉收缩压。分别利用光镜、电镜技术及苦味酸-天狼星红染色法观测分析治疗后大鼠血管形态学变化与胶原分布情况。在体外培养的人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）中,进行血管紧张素II（Ang II）刺激及替米沙坦（1或10μM）干预实验。分别采用Real-time PCR和Western印迹检测治疗后大鼠主动脉组织及培养HUASMC细胞中ACE2与Profilin-1的mRNA、蛋白表达及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）和p38-丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的磷酸化水平。结果:与WKY对照组相比,SHR大鼠血压明显升高,血管结构出现严重损伤,主动脉中膜厚度（MT）与管腔内径（LD）比值与血管周围胶原面积增加,ACE2的表达降低,而Profilin-1与I型胶原（collagen）的表达明显升高（P值均<0.05）;经替米沙坦治疗后,SHR大鼠血压水平下降,血管结构损伤得到改善,大鼠主动脉组织ACE2的表达明显上升,同时伴血管MT/LD比值降低与Profilin-1、collagen I的表达及ERK1/2磷酸化水平下调（P值均<0.05）。各组大鼠之间血管组织collagen III表达无明显差异（P>0.05）。在体外培养的HUASMC细胞中,Ang II刺激可促使细胞Profilin-1的mRNA和蛋白表达呈剂量依赖性增加,以100 nM最为明显（P<0.05）。Ang II刺激后细胞ACE2 mRNA表达出现下调而ERK1/2磷酸化水平上调（P<0.05）。替米沙坦治疗（1μM,10μM）可显著逆转细胞中Ang II诱导的Profilin-1的mRNA及蛋白表达,同时伴ACE2表达上升及ERK1/2磷酸化水平下调（P值均<0.05）。结论:长期替米沙坦治疗可明显改善高血压大鼠血管肥厚重塑及结构损伤现象,其血管保护功效很可能通过调节血管ACE2、Profilin-1的表达及ERK磷酸化信号通路来实现。通过各种手段干预ACE2及Profilin-1表达及活性,可望成为高血压病等血管重塑性疾病防治的新途径。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-13
第一部分：替米沙坦对高血压大鼠血管重塑的影响及其机制  13-34
  1 实验材料  13-17
    1.1 实验动物  13-14
    1.2 主要试剂  14
    1.3 主要试剂的配制  14-15
    1.4 仪器与设备  15-17
  2 实验方法  17-25
    2.1 大鼠饲养、分组  17
    2.2 给药方法  17
    2.3 大鼠尾动脉收缩压测量  17
    2.4 大鼠组织取材  17-18
    2.5 大鼠血管形态学检测  18-19
    2.6 实时定量PCR 检测  19-22
    2.7 Western Blot  22-24
    2.8 统计学处理  24-25
  3 实验结果  25-32
    3.1 替米沙坦对SHR 大鼠血压水平的影响  25
    3.2 大鼠胸主动脉形态学变化  25-26
    3.3 替米沙坦对大鼠胸主动脉超微结构的影响  26-27
    3.4 大鼠胸主动脉胶原分布情况  27-28
    3.5 替米沙坦对大鼠ACE2、Profilin-1 及胶原的mRNA 表达的影响  28-30
    3.6 替米沙坦对大鼠ACE2、Profilin-1 蛋白及ERK 磷酸化水平的影响  30-32
  4 讨论  32-34
第二部分：替米沙坦改善血管重塑的细胞分子学机制  34-48
  1 实验材料  34-36
    1.1 主要试剂  34-35
    1.2 主要试剂的配制  35
    1.3 仪器与设备  35-36
  2 实验方法  36-41
    2.1 人脐动脉平滑肌培养（HUASMC）及鉴定  36-37
    2.2 Ang II 诱导及替米沙坦干预  37-38
    2.3 实时定量PCR 检测  38-39
    2.4 Western Blot  39-40
    2.5 统计学处理  40-41
  3 实验结果  41-46
    3.1 原代培养血管平滑肌细胞鉴定  41-42
    3.2 Ang II 干预对血管平滑肌细胞Profilin-1 表达的影响  42-43
    3.3 替米沙坦干预对血管平滑肌细胞ACE 2、Profilin-1 mRNA 水平的影响  43-44
    3.4 替米沙坦对血管平滑肌细胞Profilin-1 蛋白及MAPK 磷酸化水平的影响  44-46
  4 讨论  46-48
结论  48-49
参考文献  49-55
综述  55-61
  参考文献  59-61
附录A 符号说明  61-63
在学研究成果  63-64
致谢  64

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血压异常 > 高血压
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