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室间隔缺损血清标志蛋白质的筛查和鉴定研究

作　者: 惠增骞
导　师: 仇小强
学　校: 桂林医学院
专　业: 心血管内科
关键词: 室间隔缺损血清标志蛋白质质谱前纤维蛋白-1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C
分类号: R541.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:筛查出室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)患者的血清标志蛋白质,并对其进行分离、纯化和鉴定,明确其身份,探讨其生理功能与心脏发育的关系。方法:(1)室间隔缺损血清标志蛋白质的筛查:采集30例VSD患者和30例健康对照者的血清,应用表面增强激光解析及电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测两组人群的血清蛋白质表达谱并分析差异蛋白质。数据分析分别由Biomarker Wizard和Biomarker Parrern两个软件完成。(2)室间隔缺损血清标志蛋白质的分离和鉴定:应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离差异蛋白质,液相色谱串联质谱(LC-MS)进一步分离并鉴定差异蛋白质,对目的蛋白质进行生物信息学分析,阐述其结构和功能。结果:室间隔缺损血清标志蛋白质的筛查结果:(1)在分子量2000-20000Da范围,VSD组与对照组表达差异有统计学意义(P<0.05)的蛋白质有15个,其中6个蛋白质表达上调,9个蛋白质表达下调。(2)分子量为5419Da、5640Da、7779Da、15141 Da和15884Da的蛋白质在VSD组与对照组的相对表达比值大于2,其中分子量为15141Da和15884Da的蛋白质相对表达比值大于5。室间隔缺损血清标志蛋白质的分离和鉴定结果:(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离出VSD组在15KDa左右与对照组存在明显差异蛋白质条带。(2)电场轨道阱回旋共振组合质谱(LTQOrbitrap)鉴定出前纤维蛋白-1(Profilin-1)的唯一片段4个,覆盖率93%,可信度为100%;半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)的唯一性片段6个,覆盖率90%,可信度为100%。(3)生物信息学分析发现,Profilin-1含140个氨基酸,分子量为15054Da,与SELDI检测到的目标蛋白质分子量一致,质谱鉴定到的4个唯一性片段与人Profilin-1完全匹配; Cystatin C含146个氨基酸,分子量为15779Da,与SELDI检测到的目标蛋白分子量一致,质谱鉴定到的6个唯一性片段与人Cystatin C完全匹配。结论:(1)VSD患者与健康对照者外周血血清蛋白质图谱存在差异。(2)分子量为5419Da、5640Da、7779Da、15141 Da和15884Da的差异蛋白质可能是与VSD相关的特异性蛋白质。(3)进一步分离鉴定发现,Profilin-1和Cystatin C可能是室间隔缺损的血清标志蛋白质之一。(4)SELDI-TOF-MS技术和LTQ-Orbitrap技术可作为寻找、鉴定疾病相关血清蛋白标志物的一种新方法。

全文目录

中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
英汉缩略词对照表  9-11
前言  11-15
  参考文献  13-15
第一部分室间隔缺损血清标志蛋白质的筛查  15-25
  1 材料与方法  15-18
  2 结果  18-20
  3 讨论  20-21
  4 结论  21-22
  参考文献  22-25
第二部分室间隔缺损血清标志蛋白质的分离和鉴定  25-51
  1 材料与方法  25-32
  2 结果  32-43
  3 讨论  43-47
  4 结论  47
  参考文献  47-51
综述  51-59
  参考文献  56-59
攻读学位期间发表的学术论文目录  59-60
致谢  60

室间隔缺损血清标志蛋白质的筛查和鉴定研究

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