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产嗜杀因子海洋酵母多样性的初步研究

作　者: 孙清荣
导　师: 池振明
学　校: 中国海洋大学
专　业: 生物工程
关键词: 海洋酵母菌嗜杀酵母嗜杀因子菌种筛选杀菌范围
分类号: S917.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本论文以梭子蟹的“乳化病”的病原酵母菌梅奇酵母(Metschnikowia bicuspidata) WCY为敏感菌,涂布筛选培养基,把目标酵母菌点种在平板上,培养后,观察有无抑菌圈来筛选嗜杀酵母。以本实验室收藏的部分海洋酵母菌为目标菌,以上述方法从300株中选出5株产嗜杀因子的海洋酵母菌,分别是2E00688,2E00797,2E00814,2E00871,2E01035。将这5-株酵母菌接种YPD培养基,经过28℃培养后,进行菌落形态、菌体形态的鉴定；经过碳源发酵和同化实验等生理生化鉴定；由11株(种)相近属酵母菌与一种亲缘关系较远的Debaryomyces hansenii的26S rDNA基因序列对比产生26S rDNA的基因序列聚类分析结果系统进化树,发现这5株酵母菌的26S rDNA基因序列分别与克鲁维酵母(Kluyveromyces aestuarii),木拉克酵母属酵母(Mrakia frigida),解脂耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolytica),克鲁维酵母(Kluyveromyces siamensis),乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的基因序列相似性最高。这5株酵母菌在GenBank中26S rDNA序列登录号分别是EU651844,EU680778,EU596441,FJ483911和FJ437050。将筛选出的5株酵母菌分类鉴定以后,进行杀菌谱实验。以待检敏感酵母菌涂布筛选培养基平板,将5株嗜杀酵母菌点种于平板上,培养后,观察抑菌圈,作出这5株嗜杀酵母菌的杀菌谱。敏感酵母菌使用本实验室收藏的梅奇酵母(M.bicuspidata)WCY,热带假丝酵母(Candida tropicalis),酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe),丝孢酵母(Trichosporon montevideense),解脂耶罗威亚酵母(Yarrowia lipolytica),白假丝酵母(Candida albicans),浅白隐球酵母(Cryptococcus aureus)。经过实验,发现这5株菌对敏感菌的抑菌效果如下：这5株菌对梅奇酵母(M.bicuspidata) WCY都有嗜杀作用,乳酸克鲁维酵母(K.lactis)对白假丝酵母(Candida albicans)有嗜杀作用,克鲁维酵母(K.aestuarii)对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe),木拉克酵母属酵母(M.frigida)对白假丝酵母(Candida albicans)和热带假丝酵母(Candida tropicalis)有嗜杀作用,解脂耶罗威亚酵母(Y.lipolytica)对热带假丝酵母(Candida tropicalis)有嗜杀作用,克鲁维酵母(K.siamensis)对白假丝酵母(Candida albicans)有嗜杀作用。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-10
第一章绪论  10-24
  1.1 海洋环境中的病原酵母菌  10-12
  1.2 产嗜杀因子的酵母菌  12-17
    1.2.1 酿酒酵母嗜杀系统  12-13
    1.2.2 Ustilago maydis嗜杀系统  13
    1.2.3 Kluyveromyces lactis嗜杀系统  13
    1.2.4 Pichia和Williopsis嗜杀系统  13-14
    1.2.5 其它酵母嗜杀系统  14-17
  1.3 嗜杀因子的作用机理  17-21
    1.3.1 酵母细胞壁组成  17
    1.3.2 嗜杀机制  17-21
  1.4 嗜杀因子的应用  21-23
    1.4.1 葡萄酒发酵中的嗜杀酵母  21
    1.4.2 嗜杀因子作为极具潜力的抗菌剂  21-22
    1.4.3 转基因植物的嗜杀因子的表达  22
    1.4.5 异聚体蛋白质分泌物  22-23
  1.5 本论文的立项依据  23-24
第二章产嗜杀因子海洋酵母菌筛选  24-27
  2.1 材料与方法  24
    2.1.1 菌株来源  24
    2.1.2 嗜杀酵母筛选培养基  24
    2.1.3 嗜杀酵母的筛选  24
  2.2 结果  24-27
    2.2.1 海洋嗜杀酵母筛选结果  24-27
第三章 5株产嗜杀因子酵母的分类鉴定  27-41
  3.1 常规鉴定  27-28
    3.1.1 培养基  27
    3.1.2 鉴定方法及步骤  27-28
  3.2 分子生物学方法鉴定  28-32
    3.2.1 菌株及质粒  28
    3.2.2 实验方法及操作  28-32
    3.2.3 系统进化树的做法  32
  3.3 实验结果  32-40
    3.3.1 常规鉴定结果  32-36
    3.3.2 分子方法鉴定结果  36-40
  3.4 本章小结  40
  3.5 讨论  40-41
第四章 5株嗜杀酵母菌的嗜杀范围  41-44
  4.1 材料与方法  41-42
    4.1.1 菌株及其来源  41
    4.1.2 嗜杀酵母筛选培养基  41
    4.1.3 嗜杀酵母的筛选  41-42
  4.2 结果  42
    4.2.1 嗜杀酵母菌的杀菌范围  42
  4.3 结论  42
  4.4 讨论  42-44
总结  44-45
创新与展望  45-46
参考文献  46-49
攻读硕士期间发表的学术论文  49-50
致谢  50

产嗜杀因子海洋酵母多样性的初步研究

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