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解耦联蛋白2在非酒精性脂肪性肝病过氧化损伤中的作用探讨

作　者: 刘琳
导　师: 管小琴
学　校: 重庆医科大学
专　业: 病理与病理生理学
关键词: 脂肪肝脂质过氧化解耦联蛋白2 京尼平维生素E
分类号: R575
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的通过观察京尼平、维生素E两者单独及联合应用对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)体外细胞模型中解耦联蛋白2(UCP2)的基因和蛋白水平表达、细胞线粒体膜电位变化和相关因子的水平变化,探讨UCP2在NAFLD过氧化损伤中的作用,以及京尼平和维生素E对NAFLD的干预作用和可能机制。方法常规培养人永生化正常胎肝L02细胞株,贴壁后分为5组:对照组常规培养72 h;模型组采用软脂酸诱导L02细胞72 h,建立非酒精性脂肪性肝病体外模型;干预组A在建模同时给予维生素E(VitE)干预72 h;干预组B在建模同时给予京尼平干预72 h;干预组C在建模同时给予两者合用干预作用72小时。油红O染色光学显微镜观察L02细胞脂变情况;检测细胞培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、甘油三酯(TG)水平,丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧酶(SOD)活力;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;RT-PCR检测各组细胞UCP2、NF-κB和TNF-α的mRNA表达情况;Western blot检测UCP2、NF-κB和TNF-α蛋白水平表达。结果1.成功诱导L02细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪性肝病体外模型。2.与对照组比较,模型组L02细胞脂肪变性显著;细胞上清ALT、AST、GGT、TG水平和MDA含量升高,SOD活力降低;线粒体膜电位降低;UCP2、NF-κB和TNF-α在基因和蛋白水平的表达均增高。3.与模型组比较,干预组A、B、C L02细胞脂肪变性面积减小、程度减轻;细胞上清ALT、AST、GGT、TG水平和MDA含量降低,SOD活力升高;线粒体膜电位增高;UCP2、NF-κB和TNF-α在基因和蛋白水平的表达有不同程度降低。尤以干预组C为最。结论1. UCP2的高表达与NAFLD的过氧化损伤有关。2. NF-κB和TNF-α参与了NAFLD的发生。3.京尼平通过抑制UCP2表达使线粒体膜电位升高,减少脂质过氧化物产生,减轻肝细胞脂肪变性。4.维生素E在一定程度上能减轻肝细胞脂肪变性,但其减少UCP2表达、升高线粒体膜电位的作用不如京尼平明显。5.京尼平和维生素E联合应用比其单独使用更能改善NAFLD体外模型肝细胞脂变情况,其机制可能为二者分别作用于不同的靶点减轻过氧化损伤,NF-κB和TNF-α的抑制表达参与其中。

解耦联蛋白2在非酒精性脂肪性肝病过氧化损伤中的作用探讨

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