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Foxp3~+CD4~+CD25~+Treg细胞在实验性自身免疫性重症肌无力发病及免疫耐受中的作用机制研究

作　者: 魏秀丽
导　师: 黄志
学　校: 重庆医科大学
专　业: 儿科学
关键词: 重症肌无力 调节性T细胞 Foxp3 IL-2 荧光定量聚合酶链反应 鼻粘膜耐受 双类似物
分类号: R746.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


第一部分Foxp3基因及调节性T细胞在重症肌无力被动转移幼鼠发病中的作用机制目的:探讨Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)、Foxp3mRNA及相关细胞因子IL-2和IFN-γ在重症肌无力被动转移模型(passive transferred myasthenia gravis,PTMG)发病中的作用机制。方法:将16只幼年雌性C57BL/6小鼠随机分为2组:模型组和对照组,模型组经腹腔注射含1.0mg/kg mAb35的Ringer,s液0.2ml建立PTMG模型,正常对照组注射不含mAb35的Ringer,s液0.2ml。采用流式细胞技术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞及Foxp3+CD4+CD25+Tregs含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析两组小鼠脾细胞中Foxp3mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组小鼠血清白介素(IL, interleukin)-2和干扰素(IFN-γ, interferon)-γ的水平。结果: (1)模型组小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞与CD4+T细胞含量的比例与对照组相比较有统计学差异[(8.82±0.74)% vs (9.89±0.88)%,(P<0.05)];模型组Foxp3+CD4+CD25+Tregs与CD4+CD25+T细胞含量的比例与对照组相比较显著降低[(6.83±1.18)% vs (8.38±0.76)%,(P<0.01)];脾细胞悬液中Foxp3mRNA表达量模型组低于对照组[(0.47±0.30) vs (1.53±1.19)P<0.05];模型组小鼠血清IL-2、IFN-γ水平分别为(24.41±13.83)ng/L、(142.31±6.05)ng/L ,高于对照组小鼠[(12.09±2.96)ng/L、(109.36±3.64)ng/L](P<0.05)。(2)模型组小鼠Foxp3+CD4+CD25+Tregs数量变化与CD4+CD25+T细胞数量呈正相关(r=0.864,P<0.01),对照组小鼠Foxp3+CD4+CD25+Tregs数量变化与CD4+CD25+T细胞数量亦呈正相关(r=0.977,P<0.01)。结论:本研究发现在PTMG小鼠中,由于Foxp3mRNA表达下调,导致Foxp3+CD4+CD25+Tregs细胞亚群表达降低,并通过上调的IL-2和IFN-γ介导了Foxp3及Tregs在重症肌无力发病机制中的作用。第二部分双类似物对重症肌无力被动转移幼鼠Foxp3及调节性T细胞的干预作用机制研究目的:对重症肌无力被动转移模型(passive transferred myasthenia gravis,PTMG)幼鼠选择双类似物(Lys262–Ala207)通过鼻粘膜免疫耐受预防性给药后,观察其临床表现及Foxp3+CD4+CD25+Tregs细胞及Foxp3 mRNA等相关免疫指标的变化,评价临床疗效及探讨Foxp3对PTMG幼鼠发病的免疫干预作用和调节机制。方法:用乙酰胆碱受体单克隆抗体(mAb35)建立C57BL/6小鼠PTMG模型,将24只幼年雌性C57BL/6小鼠分为3组:耐受组(T组)、模型对照组(MC组)、正常对照组(C组),并从致敏前10天开始每天经鼻粘膜滴入双类似物或者PBS。检测耐受后各组小鼠的临床症状,并采用流式细胞技术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞及Foxp3+CD4+CD25+Tregs含量, RT-FQ-PCR分析小鼠脾细胞中Foxp3mRNA的表达,ELISA法检测小鼠血清IL-2、IFN-γ的水平。结果:(1)T组临床症状明显轻于MC组,但未达正常;(2) T组RNS出现衰减的阳性率低于MC组,T组小鼠血清AChR–Ab的水平明显低于MC组,均较C组显著增高(;3)T组小鼠脾细胞中CD4+ CD25+T细胞/CD4+T细胞、Foxp3+CD4+CD25+Tregs/CD4+CD25+T细胞均较MC组增高(P<0.01,P<0.05),T组均低于C组,但差异无统计学意义。T组小鼠脾细胞中Foxp3mRNA表达量较MC组增高(P<0.05),T组仍低于C组,但差异无统计学意义。T组血清IL-2、IFN-γ水平较MC组显著减低,较C组均显著增高。结论:本研究发现PTMG幼鼠经双类似物免疫耐受后,Foxp3mRNA的表达水平升高,导致Foxp3+CD4+CD25+Tregs的表达水平也明显升高,且接近正常,其临床症状及相关细胞因子,如:IL-2和IFN-γ的水平也相应向正常情况转变,表明:1.双类似物(Lys262–Ala207)经鼻粘膜耐受对预防实验幼鼠发病具有一定的预防作用;2. Lys262–Ala207诱导PTMG发生免疫耐受的机制之一可能是通过上调Foxp3mRNA的表达;3.由于Foxp3+CD4+CD25+Treg对控制PTMG发病发挥着关键作用,因此推测Foxp3有可能是MG治疗的一个靶基因。

全文目录


英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-11
英文摘要  11-16
第一部分 FOXP3 基因及调节性T 细胞在重症肌无力被动转移幼鼠发病中的作用机制  16-31
  前言  16
  1 材料与方法  16-22
  2 结果  22-26
  3 讨论  26-27
  4 小结  27-29
  参考文献  29-31
第二部分 双类似物对重症肌无力被动转移幼鼠FOXP3 及调节性T 细胞的干预作用机制研究  31-45
  前言  31
  1 材料与方法  31-36
  2 结果  36-39
  3 讨论  39-42
  4 小结  42-43
  参考文献  43-45
全文总结  45-46
附图  46-49
文献综述  49-57
致谢  57-58
硕士期间撰写的文章及科研情况  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 神经肌肉疾病 > 重症肌无力
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