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人表皮光老化的蛋白质组学研究

作　者: 李文静
导　师: 李惠
学　校: 重庆医科大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 光老化表皮蛋白质组
分类号: R758.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 23次
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内容摘要

目的:人表皮光老化的机制不明。本文以老年人的正常表皮为研究对象,分析曝光部位与非曝光部位的表皮差异蛋白,探讨角质形成细胞在光老化过程中的作用及分子机制,为揭示衰老的本质,指导皮肤美容奠定基础。方法:收集老年人曝光部位和非曝光部位的正常皮肤,液氮保存。37℃生理盐水中快速复温,用DispaseII分离出表皮,提取表皮总蛋白质,并进行2-DE分离,获得表皮双向凝胶电泳图谱,PDQUEST软件进行图像分析,经强度校正、背景消减、点检测、匹配、ID校正,确定凝胶上差异蛋白点,挑选其中的蛋白点进行MALDI-TOF质谱分析及数据库查询,鉴定差异表达蛋白;最后用Western-blotting检测不同部位蛋白的表达情况,验证差异表达蛋白。结果:本课题成功建立和优化了人表皮双向电泳技术,获得了清晰、重复性高的表皮双向电泳图谱。经PDQUEST软件分析后,曝光组表皮蛋白质点数为536±17,非曝光组表皮蛋白质点数为528±15,比较两组图谱共确定差异点31个,其中15个蛋白点在曝光组中高表达,5个点特异表达;8个蛋白点在非曝光组中高表达,3个点特异表达。取其中差异明显的10个点进行质谱分析及数据库查询,成功鉴定了5个差异表达蛋白,发现热休克蛋白27(HSPB1)、膜联蛋白A2(ANXA2)、丝裂原激活的蛋白激酶3(MK03)在老年人曝光部位的表皮中高表达,角蛋白80(K2C80)仅在老年人曝光部位表皮中表达,而谷胱甘肽S转移酶A2(GSTA2)在非曝光部位表皮中高表达,并通过Western-blotting验证了热休克蛋白27、膜联蛋白A2在两组表皮中表达的差异性。提示这5种蛋白质均与皮肤的光老化有着密切关系。结论:老年人正常皮肤曝光部位和非曝光部位的表皮存在差异蛋白,经分析和鉴定的5种蛋白质均通过各种途径维持细胞的正常功能,抑制炎症反应及细胞的凋亡,与皮肤的光老化有密切的关系,为进一步研究表皮细胞在光老化过程中的作用及分子机制奠定基础。

全文目录

符号说明  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
论文题目：人表皮光老化的蛋白质组学研究  11-30
  前言  11-12
  1 材料和仪器  12-15
  2 方法  15-20
  3 结果  20-30
讨论及结论  30-34
参考文献  34-36
文献综述  36-47
致谢  47-48
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录  48

人表皮光老化的蛋白质组学研究

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