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三种弧菌共同抗原的筛选和鉴定

作　者: 李岩
导　师: 鲁义善；吴灶和
学　校: 广东海洋大学
专　业: 水产养殖
关键词: 免疫蛋白质组学弧菌共同抗原双向电泳免疫转印免疫保护率
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

近年来,随着水产养殖业的迅猛发展,养殖规模不断扩大,养殖密度也逐渐增加,导致养殖水域环境逐年恶化,疾病发生越来越频繁,给养殖业造成了巨大的经济损失。而细菌性病原是引起海水鱼暴发性疾病的主要病原,弧菌则是一种主要的病原菌,这其中又以哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌最为严重。本文对哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌全菌免疫反应性蛋白进行了研究,鉴定出了5个三种弧菌共同免疫反应性蛋白,并对其中一种蛋白质的免疫保护作用进行了验证。研究发现:哈氏弧菌免疫反应性蛋白:提取哈氏弧菌的全菌蛋白,通过双向电泳、Western Blot得到哈氏弧菌全菌蛋白2-DE图谱和哈氏弧菌全菌蛋白免疫转印图谱,用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件匹配得到45个蛋白质点,进行质谱鉴定后得到40个蛋白,这其中有4对蛋白虽在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白,有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质,另外,蛋白编号H17和H19是同一蛋白的两个亚基。溶藻弧菌免疫反应性蛋白:提取溶藻弧菌的全菌蛋白,通过双向电泳、Western Blot得到溶藻弧菌全菌蛋白2-DE图谱和溶藻弧菌全菌蛋白免疫转印图谱,用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件匹配得到40个蛋白质点,进行质谱鉴定后得到36种蛋白,这其中有2对蛋白虽在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;有一个蛋白点没有鉴定出来;有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质;另外,蛋白编号A24和A29是同一蛋白的两个亚基副溶血弧菌免疫反应性蛋白:提取副溶血弧菌的全菌蛋白,通过双向电泳、Western Blot得到副溶血弧菌全菌蛋白2-DE图谱和副溶血弧菌全菌蛋白免疫转印图谱,用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件匹配得到58个蛋白质点,从中挑选了17个蛋白质点进行质谱鉴定,得到14种蛋白,这其中有2对蛋白虽在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;有一个蛋白点没有在数据库中查找到相对应的蛋白质。三种弧菌共同抗原:用ImageMaster 2D Platinum图像分析软件对三种弧菌全菌蛋白2-DE图谱上标记了数字的蛋白点进行配对分析,匹配得到10个蛋白质点;分别对三种弧菌的这10个蛋白点进行质谱鉴定,最终鉴定得到5种蛋白质是三种弧菌共同的免疫反应性蛋白质,分别是dihydrolipoamide dehydrogenase、succinate dehydrogenase flavoprotein subunit、elongation factor Ts、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、triosephosphate isomerase。免疫保护率:从胶面提取蛋白dihydrolipoamide dehydrogenase腹腔注射斜带石斑鱼,4周后分别用哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌攻毒,计算免疫保护率。结果表明:由蛋白dihydrolipoamide dehydrogenase制备的疫苗对这三种弧菌的免疫保护率分别达到70%、60%、70%。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
1 前言  11-17
  1.1 弧菌  11-13
    1.1.1 哈氏弧菌  12
    1.1.2 溶藻弧菌  12-13
    1.1.3 副溶血弧菌  13
    1.1.4 三种弧菌共同抗原的研究  13
  1.2 蛋白质组学  13-15
    1.2.1 蛋白质组学研究的相关技术  14
    1.2.2 蛋白质组学的研究方向  14-15
  1.3 蛋白质组学在微生物研究中的进展  15
  1.4 研究的目的和意义  15-17
2 三种弧菌免疫反应蛋白的筛选  17-31
  2.1 材料与方法  17-19
    2.1.1 菌株  17
    2.1.2 主要试剂  17
    2.1.3 哈氏弧菌全菌蛋白的制备  17
    2.1.4 双向电泳  17-18
    2.1.5 兔抗哈氏弧菌免疫血清的制备  18
    2.1.6 Western Blot  18
    2.1.7 图象扫描及图象分析  18-19
    2.1.8 胶内酶切及MAIDI-TOF 质谱检测  19
    2.1.9 数据库分析  19
  2.2 结果  19-28
    2.2.1 哈氏弧菌全菌蛋白的2-DE 图谱和免疫转印图谱  19-20
    2.2.2 质谱鉴定哈氏弧菌免疫反应性蛋白质  20-22
    2.2.3 溶藻弧菌全菌蛋白的2-DE 图谱和免疫转印图谱  22-23
    2.2.4 质谱鉴定溶藻弧菌免疫反应性蛋白质  23-25
    2.2.5 副溶血弧菌全菌蛋白的2-DE 图谱和免疫转印图谱  25-26
    2.2.6 质谱鉴定副溶血弧菌免疫反应性蛋白质  26-28
  2.3 讨论  28-31
    2.3.1 哈氏弧菌免疫反应性蛋白  28-29
    2.3.2 溶藻弧菌免疫反应性蛋白  29-30
    2.3.3 副溶血弧菌免疫反应性蛋白  30-31
3 三种弧菌共同抗原的鉴定及保护性试验  31-38
  3.1 材料  31-32
    3.1.1 菌株  31
    3.1.2 实验动物  31
    3.1.3 图象分析  31
    3.1.4 质谱鉴定数据分析  31
    3.1.5 从胶面提取蛋白  31-32
    3.1.6 鱼免疫保护性实验  32
  3.2 结果  32-35
    3.2.1 软件比对共同免疫反应性蛋白质  32
    3.2.2 质谱鉴定共同免疫反应性蛋白质  32-33
    3.2.3 免疫保护性实验  33-35
  3.3 讨论  35-38
    3.3.1 dihydrolipoamide dehydrogenase(DLD)  35
    3.3.2 succinate dehydrogenase flavoprotein subunit  35-36
    3.3.3 elongation factor Ts (EF Ts)  36
    3.3.4 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)  36
    3.3.5 triosephosphate isomerase  36
    3.3.6 dihydrolipoamide dehydrogenase(DLD)的保护性  36-38
结论  38-39
参考文献  39-50
致谢  50-51
作者简历  51-52
导师介绍  52

三种弧菌共同抗原的筛选和鉴定

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