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毛细管电泳法研究铁卟啉和去铁胺之间的相互作用

作　者: 邓清清
导　师: 高中洪
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化工
关键词: 亲和毛细管电泳去铁胺铁卟啉相互作用结合常数热力学参数
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究药物与致病因子之间的相互作用,可以对药物在体内产生的作用机制有所了解,进而为药代动力学和药理毒理方面的研究提供参考依据。这在新药物的开发过程中具有重要作用。亲和毛细管电泳法（ACE）是被广泛使用的一种测定物质之间结合常数的方法。它是将一系列不同浓度的受体（或配体）作为添加剂溶于缓冲液中,制备运行溶液,然后将固定浓度的配体（或受体）作为样品。受、配体的结合物对配体的表观淌度产生影响,通过配体迁移率的变化可以求出结合常数。多个研究证明铁螯合剂去铁胺（DFO）能与铁卟啉（hemin）形成DFO-hemin复合物,进而影响hemin导致的组织损伤。本文首次使用亲和毛细管电泳的方法,研究DFO和hemin相互作用的一些化学信息,为在临床上广泛应用的DFO,提供一些药理学和毒理学方面的有用信息。本文对电泳实验的各个条件进行考察,确定了最佳的电泳操作条件。选用hemin为样品,20 mmol/L硼酸溶液（pH=8.6）为缓冲液,DFO作为缓冲液添加剂。选用管总长为60.2 cm,有效长度为50 cm的毛细管进行实验。首先,研究了分别在以下温度时（20℃、25℃、30℃、37℃）,不同浓度的DFO（10～80μM）对hemin（80μM）迁移率的影响,运用Scatchard方程拟合,计算出了温度在20℃、25℃、30℃、37℃时,DFO和hemin的结合常数K分别为12.43×10⁴ M^-1、10.113×10⁴ M^-1、7.57×10⁴ M^-1、3.46×10⁴ M^-1。结果表明,随着温度的升高,结合常数逐渐降低,但DFO与hemin在20～37℃之间都存在较强的结合能力（K值的数量级为104）。依据Van’t Hoff方程,求出20～37℃时,结合反应的吉布斯自由能变ΔG在-26.94～-28.58 kJ·mol^–1之间。通过将lnK对1/T进行线性拟合,由斜率及截距可计算出DFO与hemin相互作用的热力学参数焓变ΔH为–56.61 kJ·mol^–1、熵变ΔS为–94.77 J·mol^–1·K^–1。以上热力学数据表明,该结合反应是放热且自发进行的。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-19
  1.1 铁卟啉  8-9
  1.2 去铁胺  9-10
  1.3 物质间相互作用的研究  10-12
  1.4 毛细管电泳  12-15
  1.5 毛细管电泳测定物质之间的相互作用  15-17
  1.6 本文研究的目的与内容  17-19
2 实验部分  19-21
  2.1 实验材料  19-20
  2.2 实验步骤  20-21
3 实验结果与讨论  21-45
  3.1 实验方法的优化  21-31
  3.2 结合常数及热力学参数的测定  31-40
  3.3 讨论  40-45
4 全文总结  45-47
致谢  47-48
参考文献  48-55
附录攻读硕士学位期间完成的主要论文  55

毛细管电泳法研究铁卟啉和去铁胺之间的相互作用

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