目的:乳康合剂由仙茅、仙灵脾、熟地、柴胡、香附、陈皮、苏木、三棱、莪术、海藻、昆布、黄药子组成,具有疏肝益肾、活血化瘀、软坚散结的功效。本实验通过肌注苯甲酸雌二醇和黄体酮的方法复制乳腺增生大鼠模型,观察乳康合剂对乳腺增生大鼠乳腺形态、血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、催乳素(PRL)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、雌激素受体(ER)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)表达的影响,探讨乳腺增生病(mammary gland hyperplasia,MGH)的发病机制及乳康合剂治疗MGH的作用机理,为临床应用提供可靠的实验依据。方法:将50只清洁级雌性未孕Wistar大鼠,体重170±10g,适应性喂养一周后,随机分为5组,空白对照组(简称空白组)、模型对照组(简称模型组)、乳癖消组(简称RPX组)、乳康合剂高剂量组(简称高剂量组)、乳康合剂低剂量组(简称低剂量组)。采用肌注苯甲酸雌二醇联合黄体酮的方法造模,除空白组外,各组大鼠于后肢外侧肌注苯甲酸雌二醇0.5mg/kg·d,连续25天后,改为黄体酮4mg/kg·d,肌注,连续5天。空白组肌注等体积生理盐水,连续30天。模型建立后开始灌服药物,高剂量组给予乳康合剂28.94g/kg·d(生药量),低剂量组给予乳康合剂14.47g/kg·d(生药量);RPX组灌服乳癖消悬浊液0.67g/kg·d(含药量);空白组和模型组每天灌服等体积蒸馏水,连续30天,灌胃容量均为10ml/kg。于末次灌胃后禁食12小时,1%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉,乳腺局部脱毛,用游标卡尺测量第二对乳头的高度和直径;股动脉取血,分离血清,放射免疫法测定血清E2、P、T、PRL水平,化学发光法测定血清SOD活性,TBA比色法测定血清MDA含量;切取大鼠第二对乳腺组织,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋、切片,HE染色后,镜下观察乳腺组织形态学变化;切取第三对乳腺组织,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋、切片,免疫组化SP法检测乳腺组织中ER和AT1的表达,镜下观察:ER表达阳性细胞的细胞核内可见黄色或棕黄色颗粒,AT1表达阳性细胞显示胞浆呈黄色或棕黄色。连接Motic6.0数码医学图象分析系统测平均光密度值,半定量检测ER、AT1的表达。所有计量资料采用SPSS11.5软件进行数据分析处理,所有数据用均数±标准差(X±S)表示。结果:1 MGH大鼠各项指标的改变:模型组大鼠乳头突出、充血,颜色暗红,触之较硬,测量乳头高度(1.92±0.06)及乳头直径(1.42±0.06)较空白组(1.02±0.04,1.05±0.05)显著增加(P<0.01);镜下可见:乳腺组织增生呈弥漫性,小叶及腺泡增多,腺泡腔扩大,导管腔扩张,导管上皮细胞增生,腺胞内可见分泌物及脱落细胞,腺泡、腺管周围纤维结缔组织亦有增生。血清E2显著升高(P<0.01),P、T显著降低(P<0.01),PRL无明显改变(P>0.05);血清SOD活性明显降低、MDA含量显著增加(P<0.01);乳腺组织中ER表达阳性细胞的细胞核内可见黄色或棕黄色颗粒,AT1表达阳性细胞的细胞浆中可见黄色或棕黄色颗粒,两者在乳腺组织中的阳性表达均明显增强,其平均光密度值较空白组明显增高(P<0.01)。结果显示:MGH大鼠内分泌紊乱,ER、AT1表达增强,同时存在组织过氧化损伤。2乳康合剂对MGH大鼠乳腺形态学的影响:高、低剂量组大鼠乳头明显缩小,多隐于毛发内。与模型组(高度1.92±0.06,直径1.42±0.06)比较,高剂量组(1.11±0.05, 1.08±0.04)、低剂量组(1.23±0.07, 1.10±0.05)大鼠乳头高度及直径明显减小(P<0.01),高剂量组与RPX组(1.09±0.06, 1.08±0.06)比较无显著性差异(P>0.05)。镜下观察,各给药组均能改善大鼠乳腺增生程度,腺泡、腺管有所减少,其扩张程度得以改善,腺管上皮增生程度减轻,腺泡分泌减少,以高剂量组最显著。结果显示:乳康合剂具有改善大鼠乳腺组织增生的功效。3乳康合剂对MGH大鼠血清激素水平的影响:与模型组(E2 18.48±2.66,P 34.71±2.36,T 0.07±0.02,PRL 2.57±0.89)比较,E2:高剂量组(13.17±2.87)、低剂量组(14.61±1.88)明显降低(P<0.01),P:高剂量组(44.39±3.50)低剂量组(43.34±3.61)显著升高(P<0.01),T:高剂量组(0.10±0.02)明显升高(P<0.01),低剂量组无显著差异(P>0.05),PRL:高剂量组(3.37±0.69)显著升高(P<0.05),低剂量组无明显改变(P>0.05)。与RPX组(E2 12.10±1.59,P 40.31±4.66; T 0.11±0.03,PRL 2.82±0.71)比较,E2:高剂量组无差异(P>0.05),低剂量组高于RPX组(P<0.05),P:高剂量组明显增高(P<0.05),低剂量组无差异(P>0.05),T:高剂量组与RPX效果相当(P>0.05),PRL:无明显变化。E、P、PRL高、低剂量组间无显著差异(P>0.05),T高剂量组高于低剂量组(P<0.01)。结果显示:乳康合剂具有调节MGH大鼠内分泌紊乱的作用。4乳康合剂对MGH大鼠血清SOD活性和MDA含量的影响:与模型组(SOD 217.43±5.44,MDA 16.20±1.65)比较,高剂量组SOD(223.67±2.97)显著升高(P<0.05),MDA(13.87±0.89)明显降低(P<0.01);低剂量组SOD(220.97±4.31)及MDA(15.27±1.23)无明显改变(P>0.05)。与RPX组(SOD 223.76±5.36,MDA 13.99±1.62)比较,高剂量组SOD、MDA无显著性差异(P>0.05)。结果显示:乳康合剂具有抑制脂质过氧化,清除自由基的作用,高剂量组效果接近RPX。5乳康合剂对MGH大鼠乳腺组织ER、AT1表达的影响:与模型组(ER 0.1608±0.0161,AT1 0.1706±0.0267)比较,ER:高剂量组(0.1232±0.0126)、低剂量组(0.1331±0.0208)乳腺组织中表达显著减少(P<0.01);AT1:高剂量组(0.1279±0.0302)、低剂量组(0.1302±0.0227)表达亦明显减少(P<0.01),与RPX组(ER 0.1340±0.0152,AT1 0.1211±0.0191)比较,高、低剂量组均无显著差异(P>0.05)。结果显示:乳康合剂具有下调MGH大鼠乳腺组织ER、AT1表达的作用。结论:1 MGH的发生除与内分泌失调、ER的过表达有关外,AT1的过表达及过氧化损伤也可能是其发病机制之一。2乳康合剂通过调节内分泌平衡,下调乳腺组织ER的表达,降低其对E2的敏感性,下调AT1的表达,抑制细胞增殖,改善乳腺组织的血液循环,同时增强SOD活性,减轻过氧化损伤,从而达到治疗乳腺增生的目的。
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