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骨Ⅰ型胶原羧基端降解产物ELISA方法建立与应用

作　者: 孙云
导　师: 姚智；李兰英
学　校: 天津医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 骨吸收 Ⅰ型胶原 Ⅰ型胶原羧基交联肽酶联免疫检测骨质疏松
分类号: R446.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：骨Ⅰ型胶原的降解产物是骨吸收的特异性指标。我们选用人工合成Ⅰ型胶原α1链C末端8肽序列为监测标记,建立了测定尿中成熟Ⅰ型胶原降解产物(CTX)的固相酶联免疫方法。通过测定其在尿液中的浓度来反映骨吸收的状况,应用于代谢性骨病和骨质疏松的临床诊断、观察治疗效果,并可用于骨代谢的基础研究。本研究中建立的ELISA方法,在国内尚无该类检测产品问世。并且分析其同Ⅰ型胶原氨基端产物(NTX)测定方法的相关性,并评价其临床检测意义。方法：首先在分析Ⅰ型胶原C端结构的基础上,人工构建合成具有半抗原性质的短肽。采用碳二亚氨(EDC)将其与载体蛋白偶联。采用背部皮下注射的方法免疫兔子。在白兔血中抗体含量峰值时,提取抗血清,获得多克隆抗体。依据竞争性抑制原理,建立酶联免疫检测方法,测定尿液中的游离Ⅰ型胶原羧基端降解后产物。该方法可以定量的检测尿中CTX的含量,并用尿肌酐值校正。结果：1.本法灵敏度80μg/L,组内变异系数5.2%,组间变异系数9.6%。本研究通过测定238例不同年龄、性别个体的尿中Ⅰ型胶原的降解产物含量,并与国外Ⅰ型胶原氨基端降解产物试剂盒(NTX,Ostcomark(?))尿样的检测结果作相关性比较,相关性较好(R=0.5-0.7)。2.应用本检测方法观察了300例不同年龄段人群尿中Ⅰ型胶原的降解产物的含量,结果表明：尿中CTX/Cr比值随年龄增长而下降。儿童阶段2-3岁含量最高,此后随年龄增长比值下降,在14-16岁时达到最高值,而后下降,20-30岁和30-40年龄段含量基本相等。绝经期妇女尿中CTX含量有一增高趋势,但不显著。绝经期后妇女尿中CTX含量降低,与绝经前年龄组的CTX含量比较没有统计学意义。结论：骨的塑建(Modeling)和骨重建(Remodeling)是骨组织的不断更新、代谢的主要形式,前胶原在细胞外的断裂的多肽物是观察骨代谢的直接实验指标。测定其C-端降解产物是一种有效的骨吸收评价指标。本试验建立测定尿中CTX的ELISA方法,在国内尚未见报道。研究结果显示此测定方法同N端降解产物的免疫检测方法具有较好的相关性,证明应用人工合成多肽ELISA法,测定尿中CTX的含量,方法经济、简便、重复性好,是一种理想的测定骨吸收值的临床新手段。同时,本研究结果表明14岁以前的骨吸收及骨转换的速度最快,是骨形成与吸收重要时期。青春期后至成年期骨转换率下降。

骨Ⅰ型胶原羧基端降解产物ELISA方法建立与应用

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