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实验性精索静脉曲张大鼠生精状态及IL-1测定与分析

作　者: 马征
导　师: 王沛涛
学　校: 青岛大学
专　业: 外科学
关键词: 精索静脉曲张大鼠睾丸性激素 IL-1
分类号: R697.24
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：精索静脉曲张(varicocele,VC)是指精索内蔓状静脉丛的异常伸长、扩张和迂曲,其总发病率为10%～15%；在男性原发性不育病人中40%可见精索静脉曲张。本实验通过建立精索静脉曲张大鼠模型,观察大鼠睾丸重量、睾丸结构变化、外周血性激素水平的变化以及工L-1在大鼠睾丸内的表达变化,观察VC对大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的影响及对睾丸内免疫反应的变化,进而为VC导致不育机制研究提供新思路,为VC致男性不育的诊断和治疗提供理论依据。方法：Wistar大鼠40只,雄性,质量170-200g,购于青岛市药检所,适应性饲养1周,实验饲养条件：室温(20±2)℃,每日光照14h,黑暗10h,饮水、摄食任意。将大鼠随机分为实验性精索静脉曲张(Experimental Varicocele EV)8、12周组(EV8、EV12周组,每组12只)和相应的对照组(每组8只).通过建立精索静脉曲张模型,分别于术后8周、12周分别测量各组大鼠：①左侧精索静脉直径、睾丸重量、睾丸曲细精管生精上皮；②外周血中促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和睾酮(T)的水平；③蛋白印迹法检测大鼠双侧睾丸中IL-1蛋白的表达变化。结果：1睾丸结构改变：光镜下观察,各对照组睾丸曲细精管上皮细胞排列紧密有序,各期生精细胞排列有序,管腔内见大量精子。EV8周组大鼠双侧睾丸均有局灶性损害,呈特殊的“斑点样”表现,即病变的与正常的生精小管交错存在,主要表现为生精上皮退行性变,细胞层数减少,排列疏松、紊乱,精子发生停滞,大量生精细胞脱落于管腔中。EV12周组大鼠双侧睾丸局灶性损害灶增加,睾丸生精上皮内生精细胞层次显著减少,有的仅见1～3层,排列松散、紊乱。2睾丸质量变化：对照组8周左右侧睾丸质量(1.70±0.06,1.75±0.03),EV8周组左右侧睾丸质量(1.58±0.05,1.68±0.06),对照组12周组左右侧睾丸质量(1.74±0.03,1.77±0.03),EV12周组左右侧睾丸质量(1.50±0.06,1.63±0.04)实验组和对照组右侧睾丸比较差异有统计学意义(P<0.05),实验组和对照组左侧睾丸比较差异有显著统计学意义(P<0.01)EV12周双侧睾丸质量较EV8周组减轻(P<0.01,t=3.73：P＜0.05,t=2.55)。3血性激素水平的变化：EV 8周组和12周组曲张精索静脉血FSH水平与相应对照组肾静脉血比较明显升高(5.56±0.49,6.46±0.45,4.67±0.56,4.67±0.31)差异有显著统计学意义(P＜0.01)；EV 8周组和12周组曲张精索静脉血LH水平与相应对照组肾静脉血比较明显升高(6.29±0.10,8.12±0.87,5.62±0.42,5.57±0.43)差异有显著统计学意义(P＜0.01)；EV12周组曲张精索静脉血FSH、LH水平较EV8周组升高(P<0.01)；EV8周组和EV12周组精索静脉曲张静脉血中T水平较相应对照组明显降低(3.22±0.2、2,3.03±0.25,2.81±0.40,2.63±0.38)差异有显著统计学意义(P＜0.01)；EV12周组精索静脉曲张静脉血中T水平较EV8周组差异无统计学意义。4 il-1在大鼠双侧睾丸的表达变化：EV8周组EV12周组较相应对照组双侧睾丸IL-1α和IL-1β蛋白表达量增加,且随精索静脉持续时间的延长逐渐增多,组间比较差异有统计学意义(p＜0.05)结论：(1)VC对大鼠双侧睾丸曲细精管生精上皮产生明显的损害作用。(2)VC可引起大鼠外周血中FSH、LH水平的增加和T水平的降低,这可能与VC导致睾丸结构的破坏使睾酮分泌减少反射性的引起FSH、LH水平增加有关。(3)VC可引起大鼠双侧睾丸IL-1α和IL-1β的表达增加,且随VC持续时间的增加而增加,LI-1表达的增加与VC引起睾丸内免疫反应的变化有关。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-9
引言  9-11
第一章材料与方法  11-19
  1.1 材料  11-12
    1.1.1 主要试剂  11-12
  1.2 仪器设备  12
  1.3 主要溶液的配置  12-14
  1.4 实验动物分组及模型的建立  14
  1.5 观察指标及样本检测方法  14-17
    1.5.1 性激素水平测定  14-15
    1.5.2 大鼠血清LH和T的检测方法  15
    1.5.3 睾丸质量的测定  15
    1.5.4 睾丸组织病理切片的制备  15
    1.5.5 HE染色  15-16
    1.5.6 Western blot检测JL-1蛋白在大鼠睾丸中的表达  16-17
      1.5.6.1 组织蛋白的提取  16
      1.5.6.2 蛋白浓度的测定  16
      1.5.6.3 电泳、转膜、曝光  16-17
  1.6 统计学处理  17-19
第二章结果  19-21
  2.1 各组睾丸质量比较  19
  2.2 各组睾丸结构比较  19
  2.3 各组外周血性激素水平比较  19-20
  2.4 il-1在双侧睾丸中的表达变化  20-21
第三章讨论  21-24
第四章结论  24-25
附图  25-28
参考文献  28-30
综述  30-40
攻读学位期间的研究成果  40-41
致谢  41-42

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