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EGFR、NF-κB p65在非小细胞肺癌组织中的表达及其与转移的关系

作　者: 周璇
导　师: 项锋钢
学　校: 青岛大学
专　业: 病理学
关键词: 非小细胞肺癌表皮生长因子 NF-κB 免疫组织化学基因突变
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)与核因子(NF-κB p65)在非小细胞肺癌(NSCLC)原发瘤组织、相应淋巴结转移癌及正常肺组织中的表达并探讨NSCLC原发瘤组织中EGFR基因第19和21外显子的突变情况,研究分析EGFR和NF-κB p65的表达、EGFR基因第19和21外显子的突变与NSCLC临床病理学特征及转移的关系。以期为临床采用新思路治疗肺癌,降低转移发生率并提高生存率提供理论基础。方法①分别采用免疫组织化学SP三步法检测63例NSCLC原发瘤组织及相应淋巴结转移癌组织中EGFR和NF-κB p65的表达情况,并选择40例相应正常肺组织标本作为对照；②采用PCR扩增和基因测序方法,对40例NSCLC新鲜标本中EGFR基因第19和21外显子进行扩增,然后将扩增产物从正反两个方向进行DNA序列测定,以20例正常新鲜肺组织标本作为对照；③使用SPSS11.5软件,对免疫组织化学结果和基因突变结果进行统计学分析。P<0.05作为有显著统计学差异的标准。结果①免疫组织化学结果：EGFR主要在NSCLC肿瘤细胞胞浆表达,少量细胞的胞膜也有表达。NF-κB p65主要在肿瘤细胞胞浆表达,部分细胞的胞核也有表达。EGFR和NF-κB p65在NSCLC原发瘤组织中的表达较正常肺组织中显著增高,差别均具有高度统计学意义(Z=-5.570,P=0.000,Z=-6.230,P=0.000)；EGFR和NF-κBp65在相应淋巴结转移癌组织中的表达较正常肺组织中显著增高,差别均具有高度统计学意义(Z=-5.961,P=0.000,Z=-6.596,P=0.000)；EGFR和NF-κB p65在相应淋巴结转移癌中的表达与NSCLC原发瘤组织相比,差别无显著统计学意义(Z=-0.547,P=0.584,Z=-0.912,P=0.362)；在NSCLC组织中,EGFR和NF-κB p65的表达在NSCLC病人的不同性别、年龄、病理类型方面,差异无统计学差异(Z=-1.520--0.258,Z=-0.295--0.017,P>0.05).但二者表达在不同NSCLC的分化程度、TNM分期方面,差异有统计学差异(Z=-2.351,P<0.05；Z=-2.367,P<0.05；Z=-2.667,P<0.01；Z=-2.292,P<0.05)；②在NSCLC组织中,EGFR和NF-κB p65的表达强度经相关分析显示二者呈正相关(r=0.414,P<0.01)。③EGFR基因突变检测结果：20例正常肺组织EGFR基因均为野生型,未发现突变。40例病人中13例病人肿瘤组织中的EGFR基因存在突变(13/40,32.5%)。其中外显子19突变7例(7/13,53.8%),外显子21突变6例(6/13,46.2%)。检测到的EGFR基因第19外显子突变有3种不同的突变形式,主要是第746-753位密码子的碱基缺失。检测到的6例EGFR基因第21外显子突变中有1种不同的突变形式,为第858密码子的碱基替代突变。女性EGFR基因突变率(56.2%,9/16)明显高于男性组(16.7%,4/24)(x2=6.86,P<0.01)。非吸烟组EGFR基因突变率(63.6%,7/11)明显高于吸烟组(20.7%,6/29)(x2=6.67,P<0.01)。腺癌EGFR基因突变率(44.0%,11/25)均明显高于鳞癌(13.3%,2/15)(x 2=4.02,P<0.05)。NSCLC高分化组、中分化组、低分化组EGFR基因突变率分别为71.4%(5/7)、40.0%(6/15)、16.7%(2/18),随着分化程度的降低呈现降低的趋势,三者比较有高度统计学差异(x2=14.64,P＜0.001)。而淋巴结无转移组EGFR基因突变率为36.4%(8/22),淋巴结有转移组的突变率为27.8%(5/18),二者比较无统计学意义(x2=0.33,P＞0.50)。年龄<60岁组(33.3%,2/6)与年龄>60岁组(32.4%,11/34)、临床TNM分期中(Ⅰ+Ⅱ)期(33.3%,7/21)与(Ⅲ+Ⅳ)期(31.6%,6/19)两组EGFR基因突变率相比,无统计学差异(x 2=2.23,P>0.10、x 2=0.01,P>0.90)。结论①EGFR和NF-κB p65在NSCLC原发瘤组织中的阳性表达率及表达强度较正常肺组织中显著增高,且两者在NSCLC原发瘤组织中的表达成正相关,说明EGFR和NF-κB p65的过度表达在NSCLC的发生、发展过程中起协同作用。②EGFR和NF-κBp65在NSCLC及相应淋巴结转移癌中的阳性表达率及表达强度无显著统计学差异,说明EGFR和NF-κB p65在NSCLC原发瘤及相应淋巴结转移癌中的表达具有良好的一致性。提示临床通过手术或活检得到NSCLC原发瘤标本检测EGFR和NF-κB p65的表达可以预测转移灶EGFR和NF-κB p65的表达状况。③EGFR、NF-κB p65蛋白及EGFR基因突变与NSCLC淋巴结转移关系不大。④NSCLC中EGFR基因突变发生率较高,以女性、肺腺癌和不吸烟者多见。提示开展EGFR为靶点的肿瘤靶向治疗时,有必要先对患者进行EGFR酪氨酸激酶域突变筛选。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-9
引言  9-11
第一章材料与方法  11-18
  1.1 免疫组织化学检测  11-13
    1.1.1 研究对象  11
    1.1.2 试剂及来源  11
    1.1.3 实验所需仪器设备  11-12
    1.1.4 免疫组化染色步骤  12-13
    1.1.5 结果判定标准  13
    1.1.6 统计学处理  13
  1.2 ERFR基因第19、21外显子突变检测  13-18
    1.2.1 研究对象  13-14
    1.2.2 试剂及来源  14
    1.2.3 实验所需仪器设备  14
    1.2.4 方法步骤  14-17
    1.2.5 统计学处理  17-18
第二章结果  18-27
  2.1 免疫组织化学染色结果  18-24
    2.1.1 EGFR在NSCLC、相应淋巴结转移癌及正常肺组织及中的表达  18-20
    2.1.2 NF-κB p65在NSCLC、相应淋巴结转移癌及正常肺组织及中的表达  20-22
    2.1.3 EGFR和NF-κB p65在NSCLC组织中表达的相关性分析  22
    2.1.4 EGFR和NF-κB p65在NSCLC与相应淋巴结转移癌中表达的相关性分析  22-24
  2.2 ERFR基因19、21外显子突变检测结果  24-27
    2.2.1 EGFR基因第19外显子的突变  24-25
    2.2.2 EGFR基因第21外显子的突变  25
    2.2.3 EGFR基因突变与NSCLC临床病理特征的关系  25-27
第三章讨论  27-32
结论  32-33
问题和展望  33-34
附图  34-41
参考文献  41-44
综述  44-55
综述参考文献  55-60
攻读学位期间的研究成果  60-62
致谢  62

EGFR、NF-κB p65在非小细胞肺癌组织中的表达及其与转移的关系

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