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PCV2人工感染对仔猪免疫器官的影响以及PCV2-WH株灭活疫苗的保护作用研究

作　者: 逄莎莎
导　师: 彭克美；何启盖
学　校: 华中农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 猪圆环病毒2型 灭活疫苗 免疫效力
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


猪圆环病毒病(PCVD)是由猪圆环病毒2型引起的,继猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)之后新发现的猪的一种重要传染病。猪圆环病毒2型(PCV-2)被认为是引起断奶仔猪多系统综合征(PMWS)的主要病因,除此之外,还与猪皮炎和肾病综合征(PDNS),猪繁殖障碍,猪呼吸道病综合征(PRDC)和A2型先天性震颤(CT)等疾病有关,猪圆环病毒病(PCVD)的发生和蔓延已给养猪业造成了巨大的经济损失,中国是一个养猪大国,而到目前为止,国内尚无商业化的疫苗可以使用。鉴于此,本研究利用组织化学法和免疫组化定位表达等方法,通过比较免疫组和对照(攻毒)组猪免疫器官(脾,淋巴结,扁桃体)的病理组织学变化以及病毒的分布情况,为PCV2-WH株灭活疫苗的免疫效力研究提供依据。主要研究工作和结果包括以下几个方面：1不同抗原含量灭活疫苗免疫后攻毒,仔猪免疫器官病理组织学变化以及病毒的分布情况本试验以20头25-35日龄的仔猪为试验动物,20头仔猪随机分成4组,1组不免疫作为对照组,3组分别用含105.0TCID50、106.0TCID50和107.0TCID50等不同抗原含量的疫苗进行猪体免疫和攻毒保护性试验；攻毒后28d全部剖杀,采集脾,淋巴结,扁桃体制作石蜡切片,进行HE染色和免疫组化染色。结果显示：对照(攻毒)组猪的淋巴结和扁桃体出现严重的淋巴细胞数量减少和巨噬细胞浸润,脾出现中度的淋巴细胞数量减少和巨噬细胞浸润。免疫组与对照(攻毒)组相比,脾,淋巴结和扁桃体的病变程度较轻,Ⅲ组(107.0TCID50)脾,淋巴结和扁桃体出现轻度病变；使用免疫组化SABC法检测病毒的分布,结果显示阳性信号主要位于巨噬细胞的胞质中,细胞核中较少；对照(攻毒)组淋巴结,脾,扁桃体中的感染细胞数量比免疫组的感染细胞数量多,Ⅲ组(107.0TCID50)淋巴结,脾,扁桃体中感染细胞数量最少,差异性比较表明对照(攻毒)组与免疫组之间差异显著(P<0.05),Ⅰ组(105.0TCID50),Ⅱ组(106.0TCID50)Ⅲ组(107.0TCID50)之间相比较差异不显著。以上结果表明,不同抗原含量(105.0TCID50、106.0TCID50、107.0TCID50)的灭活疫苗能够减轻猪体的组织病理学损害,降低猪体的带毒,能够诱导机体产生免疫应答,对猪体产生一定的保护作用,抵抗PCV2感染。抗原含量为107.0TCID50的免疫效果好于105.0TCID50组和106.0TCID50组。2免疫不同免疫时间后攻毒,仔猪免疫器官病理组织学变化以及病毒的分布情况本试验以40头25-35日龄的仔猪为试验动物,40头仔猪随机分成8组,4组不免疫作为对照组,其他4组用灭活苗2mL免疫,分别于免疫后1、2、3、4周分别进行攻毒保护性试验；攻毒后28d全部剖杀,采集脾,淋巴结,扁桃体制作石蜡切片,进行HE染色和免疫组化染色。结果显示：对照(攻毒)组猪的脾,淋巴结和扁桃体出现严重的淋巴细胞数量减少和巨噬细胞浸润。免疫组与对照(攻毒)组相比,脾,淋巴结和扁桃体的病变程度较轻,免疫1w,2w,3w脾和淋巴结出现中度病变,免疫4w只出现轻度病变；免疫1w,2w扁桃体出现中度病变,免疫3w,4w扁桃体只出现轻度病变；使用免疫组化SABC法检测病毒分布,结果显示阳性信号主要位于巨噬细胞的胞质中,细胞核中较少；免疫组与对照(攻毒)组相比,感染细胞的数量减少,差异性比较表明对照(攻毒)组与免疫组之间差异显著(P<0.05),免疫4w后攻毒组各免疫器官中感染细胞的数量最少；以上结果表明,该疫苗能够减轻猪体的组织病理学损害,降低猪体的带毒,能够诱导机体产生免疫应答,对猪体产生一定的保护作用,抵抗PCV2感染。该疫苗免疫4w后能对猪体产生较强的保护作用。

全文目录


中文摘要  7-9
Abstract  9-11
第1章 猪圆环病毒2型(PCV2)研究现状  11-23
  1.1 病原学  11
  1.2 病毒的传播  11-12
  1.3 流行情况  12-13
  1.4 猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的发病机制  13-16
    1.4.1 PCV2本身的致病性  13-14
    1.4.2 PCV2对机体免疫系统的影响  14-16
  1.5 猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)  16-17
  1.6 猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的诊断  17-19
    1.6.1 电镜技术  17
    1.6.2 免疫组织化学技术(IHC)  17
    1.6.3 间接免疫荧光技术(IFA)  17-18
    1.6.4 原位杂交技术(ISH)  18
    1.6.5 间接酶联免疫吸附试验(ELISA)  18
    1.6.6 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)  18
    1.6.7 聚合酶链反应(PCR)  18-19
  1.7 猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的疫苗研究  19-23
    1.7.1 传统疫苗  19-20
    1.7.2 基因工程疫苗  20-23
第2章 研究目的和意义  23-24
第3章 材料与方法  24-29
  3.1 病毒  24
  3.2 主要药品及试剂  24
  3.3 主要仪器设备  24-25
  3.4 主要试剂的配制  25-26
  3.5 载玻片的处理  26
  3.6 试验动物及处理  26
  3.7 解剖取材及制作石蜡切片  26
  3.8 HE染色  26-27
    3.8.1 操作步骤  26-27
  3.9 免疫组化SABC法染色  27-29
    3.9.1 操作步骤  27-28
    3.9.2 结果判定  28
    3.9.3 数据统计  28-29
第4章 结果与分析  29-42
  4.1 PCV2人工感染后免疫器官病理组织学变化  29
  4.2 PCV2人工感染后免疫器官中病毒分布  29
  4.3 PCV2-WH株灭活疫苗保护效力的评价  29-42
    4.3.1 不同抗原含量灭活疫苗免疫后攻毒,免疫器官病理组织学变化以及病毒的分布情况  29-30
    4.3.2 免疫不同免疫时间后攻毒,免疫器官病理组织学变化以及病毒的分布情况  30-42
第5章 讨论与结论  42-45
  5.1 讨论  42-44
    5.1.1 免疫器官病理组织学变化对灭活疫苗保护效力的评价  42-43
    5.1.2 免疫组化检测病毒抗原对灭活疫苗保护效力的评价  43-44
  5.2 结论  44-45
参考文献  45-53
致谢  53-54
个人简介  54

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 猪
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