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日本血吸虫重组pBCG-Sj14-Sj26原核穿梭双表达载体的构建及其在耻垢分枝杆菌中的表达

作　者: 满丹丹
导　师: 戴五星
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 日本血吸虫 Sj14 Sj26 耻垢分枝杆菌 原核穿梭表达载体
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本实验主要是采用聚合酶链式反应的方法构建含日本血吸虫Sj14(FABP )基因和Sj26(GST)基因的重组质粒pBCG-Sj14-Sj26(这是个原核穿梭双表达重组质粒),然后检测它在耻垢分枝杆菌中的表达情况。主要是以实验室构建完成的pMD-Sj14, pMD-Sj26为模板,扩增得到Sj14(FABP )和Sj26(GST)这两个基因。随后将这两个基因克隆到原核穿梭表达载体pBCG-SP中,即得到重组质粒pBCG-SP- Sj14和pBCG-SP- Sj26。接着分别以pBCG-SP- Sj14和pBCG-SP- Sj26质粒为模板,采用聚合酶链式反应技术扩增出含SD序列和原核信号肽编码序列在内的Sj14和Sj26修饰基因SP- Sj14和SP- Sj26。将上述两个基因一起克隆到pBCG2100中,最终得到重组质粒pBCG- Sj14 - Sj26,最后利用电穿孔的方法将该质粒转入耻垢分枝杆菌中,经热诱导后,利用SDS-PAGE和Western-blot来检验Sj14和Sj26的表达和生物学活性。最后的结果通过PCR鉴定和证酶切鉴定,来确定pBCG-SP- Sj14、pBCG-SP- Sj26以及pBCG-Sj14-Sj26质粒构建成功。并且重组质粒pBCG-Sj14-Sj26成功的转入耻垢分枝杆菌中。通过SDS-PAGE检验出Sj14和Sj26的表达,并且利用Western-blot可检测出表达产物能与Sj26抗体发生特异性的结合。最终得出结论成功构建了日本血吸虫原核穿梭表达质粒pBCG-Sj14-Sj26,该质粒经电转入耻垢分枝杆菌后可高效表达Sj14和Sj26蛋白,并且表达的Sj26蛋白具有生物学活性。为下一步日本血吸虫重组BCG疫苗的研制奠定了基础。

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
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