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桑黄胞内多糖的分离纯化、活性及理化性质研究

作　者: 王富伟
导　师: 张小平；甘炳成
学　校: 四川农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 桑黄多糖 提取 纯化 生物活性 理化性质
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 158次
引　用: 3次
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内容摘要


本研究以桑黄菌丝体作为研究材料,对桑黄的主要活性成分——多糖进行提取纯化研究,并对不同多糖组分进行活性及理化性质研究,旨在为桑黄的基础研究和应用开发奠定基础。以多糖得率为考察指标,采用单因素和正交试验对热水、超声波、超声波复合酶三种提取方法中影响菌丝体多糖提取得率的主要因素进行研究。研究结果表明,热水浸提法的最佳工艺条件为处理时间3.5h,料液比1：50,温度90℃,多糖的提取率为2.47%；超声波法的最佳工艺条件为超声处理时间20min,料液比1：25,功率500W,多糖提取率为3.356%；超声波复合酶法的最佳工艺条件为pH6.5,酶解温度50℃,纤维素酶2.5%、果胶酶2.5%、蛋白酶1%(%对底物),酶解时间120min,多糖提取率为6.619%。采用了三氯醋酸(TCA)法,对TCA含量以及去除次数对去蛋白效果进行研究。研究结果表明,当TCA含量为7.5%,去除次数为3次,得到较好的去除效果,此时蛋白质的去除率为83.28%,多糖的损失率为11.91%。采用DEAE-52阴离子交换柱和葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析纯化后,阴离子柱阶段洗脱得到PBⅠ、PBⅡ两个组分,葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析分别得到了PBⅠ-1、PBⅡ-1两个组分,经过HPLC鉴定为单一对称峰,为均一性多糖。分别对桑黄粗多糖和纯化组分免疫活性进行研究,研究结果表明,桑黄粗多糖、PBⅡ-1显著提高小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能,均能提高小鼠的廓清指数和吞噬指数,且一定程度上提高免疫低下组小鼠的免疫能力,PBⅠ-1有一定效果但不显著。桑黄粗多糖,PBⅡ-1均能显著促进小鼠的溶血素生成,且一定程度上促进免疫低下组小鼠溶血素生成,PBⅠ-1有一定效果但不显著。理化性质研究表明,PBⅠ-1分子量约为47400,而PBⅡ-1分子量约为8710。两个组分都有糖类特征吸收峰,869cm-1附近的吸收峰说明多糖为β-吡喃糖苷键。PBⅠ-1、PBⅡ-1都由鼠李糖、阿拉伯糖,木糖,葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比分别为3.47：1.99：1：63.27：13.44和10.46：1：1.03：182.75：30.94。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
1 文献综述  9-22
  1.1 真菌多糖概要  9-10
  1.2 桑黄概要  10-12
    1.2.1 桑黄的形态特征  11
    1.2.2 桑黄的分布  11-12
  1.3 桑黄生理活性  12-15
    1.3.1 抗肿瘤作用  12-13
    1.3.2 增强机体的免疫力作用  13-14
    1.3.3 抗肝纤维化及脂质过氧化作用  14-15
    1.3.4 抗突变作用  15
    1.3.5 其它作用  15
  1.4 化学成分  15-16
  1.5 桑黄栽培和发酵研究  16-17
    1.5.1 桑黄的栽培  16-17
    1.5.2 桑黄的发酵  17
  1.6 桑黄多糖的提取、纯化研究  17-20
    1.6.1 不同提取方法的比较  17-19
    1.6.2 桑黄多糖提取现状  19-20
    1.6.3 桑黄多糖的纯化现状  20
  1.7 序言  20-22
    1.7.1 研究意义  20-21
    1.7.2 研究内容  21-22
2 试验材料及方法  22-31
  2.1 材料  22-23
    2.1.1 研究材料  22
    2.1.2 仪器  22
    2.1.3 试剂  22-23
  2.2 方法  23-31
    2.2.1 多糖标准曲线及多糖含量的计算  23
    2.2.2 蛋白质标准曲线及蛋白质含量的计算  23-25
    2.2.3 提取方法  25-26
    2.2.4 脱蛋白  26-27
    2.2.5 透析  27
    2.2.6 分级纯化  27
    2.2.7 生物活性  27-29
    2.2.8 理化性质  29-31
3 结果与分析  31-51
  3.1 桑黄多糖提取工艺研究  31-39
    3.1.1 水提法  31-32
    3.1.2 超声波法  32-35
    3.1.3 超声波复合酶法  35-39
    3.1.4 三种提取方法比较  39
  3.2 桑黄多糖纯化工艺  39-43
    3.2.1 三氯乙酸法脱蛋白  39-40
    3.2.2 离子交换层析色谱纯化工艺  40-41
    3.2.3 凝胶层析色谱纯化工艺  41-42
    3.2.4 纯度鉴定  42-43
  3.3 桑黄多糖活性研究  43-46
    3.3.1 剂量筛选试验  43-44
    3.3.2 碳粒廓清试验  44-45
    3.3.3 溶血素试验  45-46
  3.4 理化性质  46-51
    3.4.1 多糖分子量  46-47
    3.4.2 红外光谱(IR)分析  47-48
    3.4.3 多糖气相色谱(GC)分析  48-51
4 讨论  51-55
  4.1 桑黄多糖提取工艺  51-52
  4.2 桑黄多糖纯化工艺  52-53
  4.3 桑黄多糖生物活性  53
  4.4 桑黄多糖理化性质  53-55
5 结论  55-56
参考文献  56-62
致谢  62-63
在读期间发表论文  63

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