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辣椒抗根结线虫基因Me3的精细定位研究

作　者: 许小艳
导　师: 邹学校；谢丙炎
学　校: 湖南农业大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 辣椒根结线虫抗病基因Me3 SSR标记精细定位
分类号: S641.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

根结线虫是辣椒生产上一种极难防治的土传性病害,随着保护地蔬菜面积的增加,特别是日光温室的大面积推广,导致根结线虫危害日趋严重。同时,根结线虫的侵染又可加重枯萎病、根腐病等土传性真菌病害和部分细菌病害的发生。然而生产上常采用甲基溴熏蒸土壤或高毒、高残留化学杀线剂来防治根结线虫的危害,不仅会对蔬菜产品和环境造成严重的污染,而且会导致温室土壤严重退化。因此,培育辣椒抗根结线虫品种是最为经济有效的方法。常规的育种方法周期长,而迅速发展的分子标记技术大大地缩短了育种年限。因此,构建与抗根结线虫紧密连锁的分子标记,是进行辣椒抗根结线虫辅助育种的当务之急。本研究以含Me3基因的抗病自交系‘HDA149’(来源于PM687)为父本,感病自交系‘8214’为母本,构建了一个大小2133株的F2作图群体。在前人初步定位的基础上,采用群体分离分析法(Bulked Segregant Analysis, BSA),进行Me3基因的精细定位。获得的主要结果如下：1.本实验共用520对SSR引物、2对SCAR引物、2对SSCP引物和1对CAPS引物进行多态性引物初选,其中284对SSR引物和1对SSCP引物在两亲本间具有多态性,多态性比例为54.29%。2.通过抗池和感池两个DNA池,对初选筛出的285对引物进行PCR扩增分析,发现只有两对引物(SSCP_B322和EPMS658)在抗感池中具有稳定的多态性。3.用SSCP_B322和EPMS658引物对F2单株进行扩增分析,记录数据。利用作图软件JoinMap 3.0对数据进行连锁分析,发现SSCP B322和EPMS658标记与Me3基因连锁,位于Me3基因两侧,遗传图距分别为0.56 cM和1.33 cM。4.利用BC1S、BC1H和F3群体对SSCP B322和EPMS658标记进行了验证,证实两标记可有效用于辣椒抗根结线虫育种。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
1 文献综述  10-24
  1.1 根结线虫  10-14
    1.1.1 根结线虫的生物学特性  12-13
    1.1.2 根结线虫对辣椒的为害症状和致病机理  13
      1.1.2.1 为害症状  13
      1.1.2.2 致病机理  13
    1.1.3 辣椒根结线虫的防治方法  13-14
      1.1.3.1 物理防治  13-14
      1.1.3.2 化学防治  14
      1.1.3.3 生物防治  14
      1.1.3.4 微生物源及植物源农药防治  14
      1.1.3.5 农业防治  14
  1.2 辣椒分子标记  14-19
    1.2.1 辣椒分子标记技术  14-16
    1.2.2 辣椒抗病虫分子标记  16-19
      1.2.2.1 病毒病  16-18
      1.2.2.2 细菌性病害  18
      1.2.2.3 真菌性病害  18-19
      1.2.2.4 虫害  19
  1.3 辣椒抗根结线虫育种  19-23
    1.3.1 抗根结线虫基因  20-21
    1.3.2 常规育种  21
    1.3.3 分子标记辅助选择育种  21-23
  1.4. 本实验的目的意义  23-24
2 材料与方法  24-29
  2.1 本研究的实验设计  24
  2.2 实验材料  24-26
    2.2.1 辣椒材料  24-25
    2.2.2 病原  25
    2.2.3 主要实验仪器  25
    2.2.4 实验试剂  25-26
  2.3 实验方法  26-29
    2.3.1 根结线虫的收集  26
    2.3.2 根结线虫接种及鉴定  26
    2.3.3 辣椒基因组DNA提取与检测  26-27
    2.3.4 抗感池的构建  27
    2.3.5 引物及PCR扩增分析  27-28
      2.3.5.1 本实验所用引物  27
      2.3.5.2 PCR反应体系  27
      2.3.5.3 PCR扩增程序  27-28
    2.3.6 电泳及染色  28-29
      2.3.6.1 小板胶的制作及电泳  28
      2.3.6.2 银染  28-29
    2.3.7 数据统计与分析  29
    2.3.8 Me3基因图谱的构建  29
    2.3.9 标记的验证  29
3 结果与分析  29-34
  3.1 DNA检测  29-30
  3.2 辣椒接种结果的统计与抗根结线虫的遗传分析  30-32
  3.3 亲本间多态性引物的筛选  32
  3.4 Me3基因分子标记连锁图谱的构建  32-33
  3.5 分子标记的验证  33-34
4 讨论  34-38
  4.1 亲本的选配及F_2作图群体大小的选择  34-35
  4.2 关于抗性鉴定的问题  35
  4.3 SSR是适合于本研究的分子标记  35-36
  4.4 有关辣椒抗根结线虫基因的定位和克隆  36-37
  4.5 Me3基因图谱的比较  37-38
结论、创新点及下一步应开展的研究工作  38-40
  1 本文结论  38
  2 主要创新点  38
  3 下一步应开展的研究工作  38-40
参考文献  40-48
附录  48-65
  附录1 种子催芽方法  48
  附录2 药品配制  48-49
  附录3  49-64
  附录4  64-65
英文缩略词  65-66
致谢  66-67
作者简介  67

辣椒抗根结线虫基因Me3的精细定位研究

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