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靶向VEGF的siRNA诱导MCF-7凋亡及其相关机制的研究

作　者: 张菡菡
导　师: 葛银林
学　校: 青岛大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: RNA干扰 MCF-7细胞小干扰RNA 血管内皮生长因子 survivin
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：探讨靶向血管内皮生长因子(VEGF)的siRNA下调VEGF表达后对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及凋亡相关基因survivin的影响方法：体外设计并合成靶向VEGF mRNA的siRNA,采用LipofectamineTM2000转染人乳腺癌细胞MCF-7,实验设空白对照组、空脂质体组、阴性对照SCR组、3个siRNA浓度梯度组(50、100、200nnmol/L),转染24小时后,AnnexinV/PI双染结合流式细胞仪测定细胞凋亡；半定量RT-PCR、细胞免疫组化技术检测转染前后MCF-7细胞survivin基因表达的变化。结果：靶向VEGF基因的siRNA转染MCF-7后,与空白对照组比较,50nmol/L组细胞凋亡率增加(p<0.05),100、200nmol/L组细胞凋亡率显著增加(p<0.01),但空脂质体组、阴性对照SCR组与空白对照组比较无统计学意义(p>0.05);survivin mRNA在各siRNA转染组表达较之空白对照组均下调(p均<0.05,其中100nmol/L和200nmol/L转染组p均<0.01),空脂质体组、阴性对照SCR组与空白对照组比较无统计学意义(p>0.05)；survivin蛋白表达水平在各浓度转染组下调(p均<0.05,其中100nmol/L和200nmol/L转染组p均<0.01),而与未处理组比较,阴性对照SCR组与空脂质体组差异无统计学意义(p>0.05)。结论：靶向VEGF基因的siRNA转染MCF-7后诱导细胞凋亡,且与转染剂量有一定依赖关系；其分子机制与凋亡相关基因survivin表达有关。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-7
第1章实验材料  7-9
  1.1 细胞株及培养体系  7
  1.2 药品及试剂  7
  1.3 材料与仪器  7-9
第2章实验方法  9-16
  2.1 siRNA设计与合成  9
  2.2 细胞培养  9-10
  2.3 实验分组及处理  10
  2.4 siRNA转染细胞  10-11
  2.5 流式细胞术  11
  2.6 RNA提取与RT-PCR  11-13
    2.6.1 RNA提取  11-12
    2.6.2 RT-PCR检测survivin基因mRNA表达水平  12-13
  2.7 琼脂糖凝胶电泳  13
  2.8 细胞免疫组化检测survivin蛋白的表达  13-15
  2.9 统计学处理  15-16
第3章实验结果  16-22
  3.1 流式细胞仪检测细胞凋亡结果  16-18
  3.2 RT-PCR检测survivin mRNA表达结果  18-19
  3.2 细胞免疫组化检测survivin蛋白的表达结果  19-22
第4章讨论  22-25
结论  25-26
参考文献  26-28
综述  28-37
  综述参考文献  34-37
攻读学位期间的研究成果  37-38
致谢  38-39

靶向VEGF的siRNA诱导MCF-7凋亡及其相关机制的研究

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