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盐碱极端环境中抗动物病原菌的放线菌资源研究

作　者: 傅艳萍
导　师: 来航线；薛泉宏
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 微生物学
关键词: 盐碱环境 动物病原菌 拮抗性放线菌 发酵条件优化 生物试验
分类号: Q939.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


本研究选用畜禽养殖中危害严重的四种动物病原菌为靶标菌,对西北盐碱极端环境中的放线菌资源进行研究,以期获得优良拮抗放线菌和高效抑菌活性物质,从而为畜禽养殖业的发展寻找新的出路,并为西北地区盐渍土中微生物资源的开发利用奠定理论基础。以西北地区盐渍土中分离出的1311株放线菌为供试菌株,采用琼脂块法和平板孔径法获得该地区放线菌的拮抗性规律,从中筛选出对靶标菌有较好拮抗作用的菌株,并采用多相分类的方法对其进行分类鉴定;选用对鸡大肠杆菌有较好拮抗作用的菌株1202进行培养基配方和培养条件优化,研究发酵液的性质并进行生物试验。得到以下结论:1.供试放线菌以链霉菌属为主,非链霉菌仅占13.81 %,链霉菌以烬灰类群,灰褐类群,黄色类群,白孢类群,金色类群为主,占到链霉菌总数的68.08 %;拮抗性放线菌占到供试放线菌的51.26 %,其中优良拮抗放线菌占到拮抗放线菌的11.56 %-31.35 %;供试菌株对四种靶标菌的拮抗效果以牛无乳链球菌最好,鸡大肠杆菌次之。2.通过形态和培养特征观察、生理生化测定及细胞壁化学组分分析,30株优良拮抗放线菌均为链霉菌属。同时对拮抗效果较好的5株放线菌进行16S rDNA序列分析,结果表明,1202与戈壁三素链霉菌(Streptomyces gobitricini)序列同源性最高,为99.29%,应属于相同种,02-F-17与晶体链霉菌(Streptomyces crystallinus)序列同源性最高,为99.04 %,属于相同种,66J03与易变链霉菌(Streptomyces mutabilis),3501与红淡紫灰链霉菌(Streptomyces rubrolavendulae),3010与比基尼链霉菌(Streptomyces bikiniensis)的同源性在97.01- 98.4 %,可能为潜在的新种。3.临床疗效试验表明:菌株1202发酵液与同等剂量的氟苯尼考在治疗鸡大肠杆菌病方面具有相当的效果,而提前注射一定效价的发酵液可预防大肠杆菌病,毒性试验又表明该发酵液安全无毒,因此,该发酵液可用于鸡大肠杆菌病的预防和治疗。同时,该发酵液具有较好的酸碱、温度和储存时间稳定性,在pH 5-8之间,65℃以下,30 d之内,其抑菌活性基本无变化。4.菌株1202在种龄36 h,发酵时间108 h时抑菌活性最高;二次正交旋转组合设计获得的最佳发酵培养基配方为:可溶性淀粉5 g/kg,蔗糖10 g/kg,黄豆粉20.18 g/kg;正交设计获得的最优发酵条件为:发酵初始pH为7.5,装液量为50 ml,发酵温度为35℃,接种量为7 %。按照试验获得的最佳种龄和发酵时间、最佳培养基配方和最优发酵条件组合进行发酵试验,其生物效价可达到27.71μg/ml,比最初效价提高9.35倍。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-11
第一章 文献综述  11-25
  1.1 高盐环境中放线菌资源与利用的研究  11-14
    1.1.1 嗜盐放线菌的生态学研究  11-12
    1.1.2 嗜盐放线菌生物活性物质研究  12
    1.1.3 嗜盐放线菌分离方法研究  12
    1.1.4 嗜盐放线菌的分类研究  12-13
    1.1.5 嗜盐放线菌的应用研究  13-14
  1.2 放线菌活性物质研究  14-19
    1.2.1 抗生素的研究概况  14-15
    1.2.2 筛选新抗生素的方法  15-17
    1.2.3 抗生素在农业中的应用  17-19
  1.3 畜禽疾病防治的研究  19-24
    1.3.1 四种畜禽常见疾病的概况与治疗  19-21
    1.3.2 当前使用抗生素面临的困境  21-22
    1.3.3 畜禽疫病防治的发展趋势  22-24
  1.4 论文的设计思路  24-25
    1.4.1 研究目的与意义  24
    1.4.2 技术路线  24
    1.4.3 预期结果  24-25
第二章 优良拮抗放线菌的筛选  25-31
  2.1 材料  25-26
    2.1.1 供试菌株  25
    2.1.2 供试靶标菌  25
    2.1.3 培养基  25-26
  2.2 方法  26-27
    2.2.1 放线菌初步鉴定  26
    2.2.2 拮抗性放线菌筛选  26-27
  2.3 结果与分析  27-30
    2.3.1 供试放线菌类群组成  27
    2.3.2 拮抗性放线菌筛选  27-28
    2.3.3 发酵液拮抗性试验  28-30
  2.4 结论与讨论  30-31
第三章 优良拮抗放线菌的分类鉴定  31-52
  3.1 材料  31-33
    3.1.1 菌株  31
    3.1.2 培养基  31-33
    3.1.3 主要生化试剂  33
  3.2 方法  33-38
    3.2.1 形态和培养特征观察  33-34
    3.2.2 生理生化试验  34-35
    3.2.3 抗生素抗性试验  35
    3.2.4 生态条件试验  35-36
    3.2.5 数值分类  36
    3.2.6 细胞壁化学组分分析  36
    3.2.7 16S rDNA 序列分析  36-38
  3.3 结果与分析  38-51
    3.3.1 形态和培养特征  38-42
    3.3.2 生理生化指标  42-45
    3.3.3 抗生素抗药性试验  45-46
    3.3.4 生态条件试验  46-47
    3.3.5 数值分类  47-48
    3.3.6 细胞壁化学组分分析  48-49
    3.3.7 16S rDNA 序列分析  49-51
  3.4 结论与讨论  51-52
第四章 优良拮抗放线菌生物试验及发酵液性质初步研究  52-62
  4.1 材料  52-53
    4.1.1 对照药品  52
    4.1.2 供试靶标菌  52
    4.1.3 供试菌株  52
    4.1.4 试验动物  52
    4.1.5 培养基  52-53
  4.2 方法  53-56
    4.2.1 抗生素标准曲线的测绘  53
    4.2.2 发酵液效价测定  53-54
    4.2.3 发酵液体外最小抑菌浓度的测定  54
    4.2.4 发酵液毒性试验  54
    4.2.5 发酵液生物治疗试验  54-55
    4.2.6 发酵液稳定性  55-56
    4.2.7 色谱条件  56
  4.3 结果与分析  56-60
    4.3.1 氟苯尼考和红霉素标准曲线绘制  56-57
    4.3.2 发酵滤液效价测定  57
    4.3.3 MIC 的测定  57
    4.3.4 毒性试验  57
    4.3.5 发酵液生物试验  57-58
    4.3.6 发酵液稳定性试验  58-60
    4.3.7 发酵液指纹图谱的制备  60
  4.4 结论与讨论  60-62
第五章 菌株1202 液体发酵条件研究  62-69
  5.1 材料  62
    5.1.1 供试菌株  62
    5.1.2 供试靶标菌  62
  5.2 方法  62-64
    5.2.1 最佳种龄及发酵时间测定  62
    5.2.2 发酵培养基优化  62-64
    5.2.3 发酵工艺优化  64
    5.2.4 试验设计及数据处理  64
  5.3 结果与分析  64-67
    5.3.1 种龄及最佳发酵时间的测定  64-65
    5.3.2 发酵培养基优化  65-66
    5.3.3 发酵工艺优化  66-67
  5.4 结论与讨论  67-69
第六章 结论  69-71
  6.1 优良拮抗放线菌的筛选  69
  6.2 优良拮抗放线菌的分类鉴定  69
  6.3 优良拮抗菌发酵液生物试验及性质初步研究  69-70
  6.4 菌株1202 液体发酵条件优化  70-71
参考文献  71-78
附图  78-85
致谢  85-86
作者简介  86

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学 > 应用微生物学
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