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鸡冠菌多糖提取工艺和药理作用研究

作　者: 张津
导　师: 郁建平
学　校: 贵州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 鸡冠菌多糖 植物复合酶 提取 纯化 抗氧化 降血脂
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 43次
引　用: 1次
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内容摘要


鸡冠菌(Laetiporus sulphureus)是一种常见的食用和药用价值都很高的真菌。近年来,随着药用真菌多糖研究的不断深入和发展,发现真菌多糖具有抗病毒、降血脂、抗肿瘤、免疫调节、延缓衰老等多种生物活性,是一种纯天然无毒副作用的成分。但关于鸡冠菌多糖的研究却很少。本实验以鸡冠菌为原料,系统地研究了鸡冠菌多糖的分离纯化技术,对纯化后所得最多的LSP3多糖的理化性质和单糖组成进行了初步探讨,并对其抗氧化和降血脂的活性进行了检测。研究的主要内容如下：1、鸡冠菌多糖的热水浸提工艺优化通过对浸提温度、浸提时间、浸提次数、料水比、溶剂pH值进行单因素实验选取灵敏因素进行正交实验。确定热水浸提的最佳工艺条件为：浸提时间4小时,浸提温度90℃,浸提次数2次,料水比1：40。2、鸡冠菌多糖的酶解热水浸提联用工艺研究通过对酶加入量、浸提温度、浸提时间、料水比、酶解液pH值进行单因素实验选取灵敏因素进行正交实验。确定酶解浸提法的最佳工艺条件为：酶解阶段：浸提时间2小时,浸提温度48℃,料水比1：20,加酶量：0.5%,pH值=5.5；酶解后热水浸提阶段：浸提时间2小时,浸提温度80℃,浸提次数1次,料水比1：20。实验结果表明酶解热水法联用比热水浸提法提取鸡冠菌多糖,浸提时间缩短近一半,得率提高30.15%。3、乙醇沉淀工艺研究通过实验探讨上述两种方法的浸提液浓缩比和乙醇加量对多糖沉淀率的影响,结果表明热水浸提液醇沉最佳工艺条件为浓缩液占原体积的1/10,乙醇浓度为80%时,沉淀率达到90.13%。酶解加热水浸提液醇沉最佳工艺条件为浓缩液占原体积的1/6,乙醇浓度为80%时,沉淀率达到91.43%。4、除蛋白质方法的比较采用考马斯亮蓝G-250比色法测定蛋白质含量。比较了Sevag法和酶解加Sevag法、10%三氯乙酸和鞣酸沉淀法去除鸡冠菌多糖提取物中的蛋白质。综合考虑蛋白质清除率和多糖损失率后确定采用酶解加Sevag法去除鸡冠菌多糖提取物中的蛋白质。5、大孔树脂纯化鸡冠菌多糖对6种大孔树脂进行筛选确定用AB-8大孔树脂进行鸡冠菌多糖的纯化。详细研究AB-8大孔树脂纯化鸡冠菌多糖的过程,确定条件为：洗脱速度2ml/min, NaCl溶液浓度0.2mg/ml。6、鸡冠菌多糖的DEAE-纤维素分离取纯化鸡冠菌多糖上DEAE-纤维素柱,结果蒸馏水洗脱得两种中性多糖LSP1和LSP2。0.1、0.2、0.3mol/1NaCl溶液分别洗脱得三种不同的酸性多糖LSP3、LSP4和LSP5。7、鸡冠菌多糖的单糖组分研究对DEAE-纤维素柱分离量最多的LSP3多糖采用气相色谱法测定其单糖组分,以L-鼠李糖、D-岩藻糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖为标准样品,肌醇为内标。测检结果表明LSP3多糖主要由D-岩藻糖4.69%、D-半乳糖14.46%、D-甘露糖7.85%和D-葡萄糖73.00%组成。8、鸡冠菌多糖的抗氧化作用本实验采用化学体系产生超氧阴离子自由基和羟自由基,研究鸡冠菌多糖对这两种自由基的清除能力。实验表明鸡冠菌多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基皆表现出很好的清除效果。100μg/ml样品对超氧阴离子自由基(O2-·)、羟基自由基(·OH)的清除分别达到了28.19%和51.84%。9、鸡冠菌多糖的降血脂的作用本实验采用预防型高脂模型小鼠动物实验。实验表明鸡冠菌多糖低剂量、中剂量、高剂量组对小鼠血清中的TC、TG、LDL-C与模型组相比,都有一定程度的降低。说明鸡冠菌多糖有一定的降血脂的作用,中剂量组和高剂量组降脂效果尤为明显。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-10
第一章 文献综述  10-24
  1.1 多糖的研究概况  10-11
  1.2 真菌多糖的研究进展  11-14
    1.2.1 真菌多糖的结构  11
    1.2.2 真菌多糖的药理作用  11-14
  1.3 多糖研究方法  14-21
    1.3.1 多糖的提取  14-16
    1.3.2 多糖的分离纯化  16-19
    1.3.3 多糖的纯度鉴定技术  19
    1.3.4 多糖的结构分析技术  19-20
    1.3.5 多糖的含量测定  20-21
    1.3.6 多糖的相对分子质量测定  21
  1.4 鸡冠菌的研究现状  21-22
  1.5 论文的意义和内容  22-24
    1.5.1 研究的目的与意义  22-23
    1.5.2 课题研究的主要内容  23-24
第二章 鸡冠菌多糖提取工艺的研究  24-57
  2.1 实验材料、试剂与仪器  24-25
    2.1.1 材料  24
    2.1.2 主要试剂及化学用品  24
    2.1.3 主要仪器  24-25
  2.2 实验方法  25-35
    2.2.1 蒽酮-浓硫酸法测定多糖含量  25
    2.2.2 鸡冠菌多糖含量的测定  25-26
    2.2.3 热水浸提鸡冠菌多糖工艺设计  26-28
    2.2.4 酶解热水法联用浸提鸡冠菌多糖工艺设计  28
    2.2.5 乙醇沉淀工艺的研究  28-29
    2.2.6 蛋白质的去除  29-30
    2.2.7 大孔树脂纯化鸡冠菌多糖  30-32
    2.2.8 鸡冠菌多糖的脱色  32
    2.2.9 透析法除小分子杂质  32
    2.2.10 鸡冠菌多糖的DEAE-纤维素柱层析  32-34
    2.2.11 鸡冠菌多糖的纯度测定  34
    2.2.12 气相色谱法测定多糖的单糖成分  34
    2.2.13 鸡冠菌多糖的理化性质研究  34-35
    2.2.14 鸡冠菌多糖的热水浸提法提取、分离和纯化工艺流程  35
  2.3 结果分析  35-57
    2.3.1 蒽酮-硫酸法测定鸡冠菌多糖含量条件的确定  35-37
    2.3.2 鸡冠菌多糖浸提工艺的研究  37-48
    2.3.3 乙醇沉淀工艺的研究结果  48
    2.3.4 多糖中蛋白质杂质的去除工艺研究  48-51
    2.3.5 大孔树脂纯化鸡冠菌多糖工艺的研究  51-53
    2.3.6 鸡冠菌多糖脱色工艺比较  53
    2.3.7 透析法除小分子杂质  53
    2.3.8 DEAE-纤维素柱层析分离纯化结果  53-55
    2.3.9 LSP3的纯度鉴定  55
    2.3.10 气象色谱法测定LSP3的单糖的组成  55-56
    2.3.11 鸡冠菌多糖提取优化艺结论比较  56
    2.3.12 鸡冠菌多糖理化性质分析  56-57
第三章 鸡冠菌多糖的药理作用研究  57-65
  3.1 鸡冠菌多糖抗氧化作用的研究  57-60
    3.1.1 材料与方法  57
    3.1.2 结果与分析  57-59
    3.1.3 小结  59-60
  3.2 鸡冠菌多糖降血脂作用研究  60-65
    3.2.1 材料与方法  60-62
    3.2.2 结果与分析  62-64
    3.2.3 小结  64-65
第四章 结论与讨论  65-67
致谢  67-68
参考文献  68-74
附录  74-75

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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