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微分离系统中整体/混合毛细管色谱柱的制备与性能评价方法研究

作　者: 谢晶鑫
导　师: 毕开顺；钱小红；张养军
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 中药分析学
关键词: 毛细管整体柱混合型色谱柱纳升级液相色谱液-质联用系统多肽分离
分类号: R917
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

液相色谱-质谱联用技术(Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)是结合了色谱的分离及质谱的定性分析性能于一体的一种分析方法。LC-MS技术具有很高的选择性、灵敏度、分离度和分析速度。近年来,随着LC-MS新技术的不断发展和完善,该技术已经成为现代分析手段中不可缺少的组成部分,是小分子药物、复杂生物样本中多肽、蛋白质定性、定量分析的有力工具。本论文首先研究了毛细管整体柱的制备方法。采用甲基丙烯酸月桂酯作为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,十二醇、1,4-丁二醇及二甲亚砜混合物为致孔剂,在内径为75μm、不同长度的石英毛细管内制备了具有良好机械性能和化学稳定性的反相毛细管整体柱,并对所合成的毛细管整体柱进行了电镜表征、流速测定、柱长与柱压的变化关系分析,表明毛细管整体柱的通透性良好,柱压低。因此,可通过延长柱长的方法进一步提高其分离度。将所制备的毛细管整体柱装于高效液相色谱仪上进行牛血清白蛋白和血浆样本的胰酶酶解液的分离,表明所制备的毛细管整体柱可以满足一般多肽混合物的分离分析。在以上研究的基础上,制备了一种应用于液-质联用系统中的带尖头的新型混合型色谱柱。在毛细管喷头部位制备长度约为1 cm的反相毛细管整体填料作为筛板,然后在该毛细管色谱柱的其余部分,采用匀浆装柱法填充颗粒度为5μm的C18硅胶填料(Octadecylsilyl,ODS),再将其装于LC-MS系统中,以标准蛋白、酵母蛋白为分析对象,考察其在LC-MS中离子化效率、色谱柱性能和寿命,并与商品化的色谱柱进行色谱性能比较,未见显著性差异。在实际应用中分离分析鼠肝细胞全蛋白酶切液,将强阳离子交换的28个馏分分别进行分离分析,通过数据处理证实获得了较好的分离效果,在假阳性率为1%的条件下鉴定到1262个肽段,513个蛋白簇。实验结果表明该混合型毛细管色谱柱没有偏性,可以在液-质联用系统中获得应用。

全文目录

中文摘要  9-10
Abstract  10-12
第一章前言  12-15
  1.1 微分离系统中常用毛细管色谱柱的种类及优缺点  12-14
  1.2 立题依据和研究思路  14-15
第二章甲基丙烯酸月桂醋整体柱的制备方法研究及其在微分离分析系统中的应用  15-27
  2.1 实验部分  15-18
    2.1.1 毛细管内壁的预处理  16
    2.1.2 甲基丙烯酸月桂酯整体柱的制备  16
    2.1.3 标准蛋白的酶切方法  16-17
    2.1.4 血浆样本的酶切方法  17
    2.1.5 标准蛋白酶切产物的质谱分析  17
    2.1.6 nano-HPLC色谱分析条件  17-18
  2.2 结果与讨论  18-27
    2.2.1 预处理及聚合反应示意图  18
    2.2.2 毛细管整体柱的结构表征  18-19
    2.2.3 制备条件的选择与优化  19-22
    2.2.4 毛细管整体柱性能考察  22-25
    2.2.5 毛细管整体柱在人血浆胰蛋白酶酶切混合物分离中的应用  25-27
第三章两种混合型毛细管色谱柱的制备及性能评价  27-47
  3.1 实验部分  27-33
    3.1.1 混合型毛细管整体柱的制备方法  27-29
    3.1.2 分析样本的制备  29-31
    3.1.3 分析条件  31-33
  3.2 结果与讨论  33-47
    3.2.1 两种混合柱的制备方法及条件  33-34
    3.2.2 平头混合毛细管色谱柱的柱效考察  34-35
    3.2.3 带尖头的混合毛细管色谱柱与传统的毛细管填充色谱柱的柱效比较  35-37
    3.2.4 带尖头混合毛细管色谱柱的重现性与稳定性  37-38
    3.2.5 带尖头混合毛细管色谱柱寿命考察  38-39
    3.2.6 带尖头混合毛细管色谱柱的应用  39-47
第四章结论  47-48
参考文献  48-54
致谢  54-55
个人简历  55

微分离系统中整体/混合毛细管色谱柱的制备与性能评价方法研究

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