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玉米自交系植株水稻黑条矮缩病毒的积累

作　者: 张爱红
导　师: 朱宝成；苗洪芹
学　校: 河北大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 玉米自交系水稻黑条矮缩病毒玉米粗缩病积累
分类号: S435.13
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 28次
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内容摘要

玉米粗缩病是一种严重危害玉米的病毒病害,该病是由水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf fijivirus, RBSDV)引起。RBSDV是一种双链RNA病毒,曾在中国、日本等国家流行,严重影响玉米产量。本文首先对应用间接酶联免疫法(ID-ELISA)测定玉米叶片中RBSDV的实验条件进行探索,然后在抗病性鉴定的基础上,按照玉米粗缩病病情严重度分级标准,采集不同病级叶片,对不同抗性玉米自交系、不同病级植株体内的RBSDV增殖差异做了初步研究,同时确定了竞争酶联免疫方法对不同品种、不同病级植株体内内源激素的检测方法,对不同抗性玉米自交系中内源激素水平差异做了初步分析。将水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)主要外壳蛋白P10的单克隆抗体应用于玉米病株叶片中RBSDV的检测,对实验所需包被缓冲液、抗血清使用浓度、样品稀释度、样品储存条件作了一系列优化选择。结果显示：柠檬酸缓冲效果最好,PBS缓冲液次之,碳酸缓冲液最差；RBSDV P10单克隆抗体倍比稀释至1,000×、1,500×和2,000×,均可检测到RBSDV,标本OD值/阴性对照OD值(P/N)在2.631～5.027之间,选择2,000x的稀释浓度为最经济、高效；ID-ELISA检测RBSDV,经1/80稀释后,在新鲜和4℃保存1d的标样中,仍能检测出RBSDV，P/N值为2.836～2.681。但随稀释度增大,P/N值减小,因此抗原的研磨稀释使用浓度以1/10-20(W：V)为最好。在-20℃保存1周的标样中稀释10倍未检测到RBSDV，P/N值为1.555<2。可见,检测玉米叶片中的RBSDV的ID-ELISA适宜方法为：使用柠檬酸缓冲液(pH 6.1)、RBSDV P10单克隆抗体稀释浓度1：2000,用新鲜玉米叶片标样,研磨稀释10～20倍。在抗病性鉴定的基础上,根据玉米粗缩病的病情严重度分级标准,对已知抗性水平的抗、中抗和感病自交系材料逐株进行病情严重度分级调查。采集不同级别病株的新叶,用ID-ELISA检测病株叶片中的RBSDV相对浓度。结果显示：同一抗性水平、不同级别的自交系病株叶片内的RBSDV浓度有显著差异,随病株病级加大,病毒浓度升高；而相同病级、不同抗性水平自交系叶片内的RBSDV浓度无显著差别；但抗病自交系病株叶片中的病毒总浓度显著低于感病自交系材料。此试验结果表明：玉米粗缩病病株叶片内的病毒浓度与生物学症状呈正相关,病毒浓度越高,病情越重。RBSDV一旦侵入寄主,在抗病、感病和中抗的自交系植株体内均可增殖,并运转到新生叶片。此结论为揭示玉米抗粗缩病的机理奠定了基础。ELISA检测植物内源激素具有专一、快捷、前处理简单、能够大批量同时测定等优点。本文研究了玉米叶片中4种激素：生长素(IAA)、细胞分裂素(ZR)、脱落酸(ABA)和赤霉素(GA3)的提取方法以及应用竞争ELISA对4种内源激素的检测方法。结果显示：在4级病株中IAA、ZR、GA3含量均低于健康植株；但ABA含量较健康植株高。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
引言  11-13
第1章文献综述  13-28
  1.1 玉米粗缩病的发生历史和现状  13
  1.2 玉米粗缩病的症状特点和危害损失  13-14
  1.3 玉米粗缩病病原研究  14-20
    1.3.1 斐济病毒属的粒子形态和粒子特性  14-15
    1.3.2 病毒粒子在寄主植物和介体飞虱体内的分布  15-16
    1.3.3 斐济病毒属的结构蛋白  16
    1.3.4 斐济病毒属的基因组特点  16-17
    1.3.5 病毒的检测方法  17-20
  1.4 玉米粗缩病的介体昆虫、传毒特性和寄主范围  20-21
    1.4.1 介体昆虫  20
    1.4.2 传毒特性  20-21
    1.4.3 寄主范围  21
  1.5 玉米粗缩病的发病规律  21-22
  1.6 玉米粗缩病的预测预报  22
  1.7 玉米粗缩病的防治要点  22-23
    1.7.1 加强监测和预报  22-23
    1.7.2 调整播期  23
    1.7.3 清除杂草、减少毒源  23
    1.7.4 拔除病株.加强田间管理  23
    1.7.5 化学防治  23
    1.7.6 选用抗病品种  23
  1.8 抗玉米粗缩病育种研究进展  23-26
    1.8.1 抗病性鉴定方法  24
    1.8.2 病情严重度分级和抗性评价指标  24-25
    1.8.3 抗病育种的研究  25-26
  1.9 玉米抗粗缩病机理研究目的及应用  26-28
第2章 ID-ELISA检测玉米叶片中RBSDV浓度实验条件的优化  28-33
  2.1 实验材料  28
  2.2 药品与试剂  28
  2.3 实验主要仪器  28-29
  2.4 实验方法  29-30
    2.4.1 溶液的配制  29
    2.4.2 ID-ELISA检测条件的优化  29-30
      2.4.2.1 最佳包被缓冲液的选择  29
      2.4.2.2 最适宜抗血清使用浓度的确定  29
      2.4.2.3 适宜抗原使用浓度的确定  29
      2.4.2.4 标样储存条件的确定  29-30
    2.4.3 检测RBSDV的方法  30
  2.5 结果与分析  30-32
    2.5.1 最佳包被缓冲液的选择  30-31
    2.5.2 最适宜抗体使用浓度的确定  31
    2.5.3 适宜抗原使用浓度的确定  31
    2.5.4 标样储存条件的确定  31-32
  2.6 小结  32-33
第3章水稻黑条矮缩病毒在不同抗性玉米自交系叶片内的积累研究  33-38
  3.1 实验材料  33
  3.2 药品与试剂  33
  3.3 实验主要仪器  33-34
  3.4 实验方法  34-38
    3.4.1 不同抗性玉米自交系材料感染玉米粗缩病后病情严重度调查  34
    3.4.2 间接酶联免疫吸附法检测不同抗性自交系材料叶片内RBSDV的浓度  34-35
    3.4.3 数据处理  35
    3.4.4 结果与分析  35-37
    3.4.5 小结  37-38
第4章玉米叶片内内源激素ELISA测定方法  38-51
  4.1 实验材料  38
  4.2 药品与试剂  38
  4.3 实验主要仪器  38-39
  4.4 实验方法  39-42
    4.4.1 溶液配制  39
    4.4.2 样品中激素的提取  39-40
    4.4.3 样品测定  40-42
  4.5 结果计算  42-43
  4.6 结果分析  43-51
    4.6.1 不同品种不同病级玉米叶片中IAA差异变化  43-44
    4.6.2 不同品种不同病级玉米叶片中ZR差异变化  44-46
    4.6.3 不同品种不同病级玉米叶片中ABA差异变化  46-47
    4.6.4 不同品种不同病级玉米叶片中GA3差异变化  47-51
第5章结论与创新点  51-52
参考文献  52-60
致谢  60

玉米自交系植株水稻黑条矮缩病毒的积累

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