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芹菜黄酮的分离与纯化技术研究

作　者: 严志慧
导　师: 罗军武；王克勤
学　校: 湖南农业大学
专　业: 茶学
关键词: 芹菜黄酮聚酰胺树脂高效薄层色谱水解高速逆流色谱
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

芹菜（Apium graveolens L）作为药用栽培的植物资源,在15世纪引入中国。因芹菜具有一定的清热、止血、祛风等药用保健功能,芹菜还有“药芹”之称。芹菜中含有丰富的化学活性成分,叶片中含有丰富维生素和矿质元素,尤其是内含丰富的芹菜黄酮类物质具有抗癌、降脂、减肥等多种药理功效。以往科研工作者主要集中对芹菜黄酮类化合物的动物体内代谢过程以及药理功效研究,以及芹菜初级产品的开发利用。对于芹菜黄酮物质的分离、纯化研究则鲜有报道。本研究对芹菜黄酮的定性、定量分析方法进行了研究;对聚酰胺树脂分离纯化芹菜黄酮工艺进行了探讨;对芹菜黄酮水解工艺进行了探索;应用高速逆流色谱分离技术分离了芹菜黄酮。对于芹菜黄酮类物质的分离纯化制备和综合利用开发提供了参考价值。主要研究内容和结果如下:1.建立了芹菜黄酮的定性、定量分析方法。应用双波长分光光度法测定芹菜总黄酮（以芦丁为对照品）。其标准曲线方程为:C=0.09338ΔA+0.0004725,R²=0.9992;建立了芹菜素的液相检测方法。色谱条件:色谱柱:Kromasil C₁₈（150mm×4.6mm,5μm）;流动相:乙腈-水（35:65）;流速1.0mL/min;柱温35℃;UV检测,检测波长:270nm。以上检测方法简便、准确、重现性好,能够很好的测定芹菜中黄酮成分含量。建立了芹菜素的聚酰胺高效薄层鉴定方法。薄层展开剂为氯仿:甲醇:乙酸乙酯溶剂（4:3:3）,紫外254nm下照相,检测芹菜素的Rf值也达到0.32。2.建立了聚酰胺树脂的柱层析分离纯化芹菜黄酮的优化工艺。确定该树脂的纯化优化条件:0.382 8mg/mL的芹菜黄酮溶液,以0.5mL/min的流速上样后用3BV的水洗去杂质,然后用3BV的40%乙醇以1mL/min洗脱,芹菜黄酮纯度达到80.25%。3.确定了芹菜黄酮的酸水解优化工艺。通过单因素和正交试验,确定黄酮酸水解影响因素强弱为:水解温度)盐酸浓度)水解时间:其优化参数为:1.2mol/L的盐酸浓度,水解时间2h,水浴温度为80度。采用此工艺参数水解芹菜黄酮的芹菜素含量平均达到7.189mg/g。芹菜黄酮水解率达到84.97%。4.建立了芹菜黄酮的高速逆流色谱分离技术方法。逆流色谱分离优化条件:流速为2mL/min,紫外检测波长为280nm,转速为700rpm/min。芹菜黄酮的逆流分离溶剂体系为乙酸乙酯:乙醇:乙酸:水（4:1:0.2:5,v/v）,分离的芹菜黄酮的纯度达到98.27%。本文较系统的建立了芹菜黄酮的定性、定量分析方法,分析了湖南不同地区的芹菜中芹菜素的含量,确定了聚酰胺树脂分离纯化芹菜黄酮的优化工艺,建立了高速逆流色谱法分离芹菜黄酮的技术参数,为系统、合理、全面的开发利用芹菜资源提供了科学的依据,本研究具有良好的实际应用价值。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章前言  11-23
  1. 芹菜品种资源分布  11
  2. 芹菜中主要有效成分研究进展  11-12
  3. 芹菜黄酮的分离纯化研究进展  12-14
  4. 芹菜黄酮的分析检测研究进展  14-15
  5. 芹菜黄酮的药理作用研究进展  15-17
  6. 本研究的目的与意义  17
  7. 本研究的主要研究内容  17-18
  8 研究的主要技术路线  18-23
第二章芹菜黄酮分析方法研究  23-36
  1. 材料与方法  23-25
    1.1 试验材料  23
    1.2 试验试剂  23
    1.3 试验仪器  23
    1.4 实验方法  23-25
  2. 结果与分析  25-33
    2.1 应用双波长法测定芹菜黄酮含量研究  25-32
      2.1.1 检测波长的选择  25
      2.1.2 标准曲线的建立  25-26
      2.1.3 精密度试验  26
      2.1.4 稳定性试验  26-27
      2.1.5 重复性试验  27
      2.1.6 回收率试验  27
      2.1.7 湖南各地区的芹菜黄酮的测定  27-30
      2.2.4 精密度试验  30-31
      3.2.5 重复性试验  31
      3.2.6 回收率试验  31
      3.2.7 各地芹菜中芹菜素含量的比较研究  31-32
    2.3 芹菜中芹菜素的高效薄层色谱分析  32-33
  3 小结与讨论  33-35
    3.1 关于双波长法测定芹菜黄酮含量的研究  33
    3.2 关于高效液相色谱法测定芹菜素的含量研究  33-34
    3.3 关于芹菜素的薄层色谱分析研究  34-35
  参考文献  35-36
第三章芹菜黄酮分离与纯化技术的研究  36-45
  1 材料与方法  36-38
    1.1 试验材料  36
      1.1.1 试验材料  36
      1.1.2试验试剂  36
      1.1.3试验仪器  36
    1.2试验方法  36-37
      1.2.1 聚酰胺树脂预处理  36-37
      1.2.2 芹菜样品的制备  37
    1.3 芹菜黄酮含量的测定  37
    1.4 树脂动态吸附试验  37
    1.5 聚酰胺树脂吸附条件的优化  37
    1.6 聚酰胺树脂解析条件的优化  37-38
    1.7 树脂吸附芹菜黄酮含量的计算  38
    1.8 芹菜黄酮的定性研究  38
  2 结果与分析  38-43
    2.1 树脂动态吸附曲线  38
    2.2 聚酰胺树脂吸附条件优化  38-43
      2.2.1 上样流速对黄酮吸附量的影响  38-39
      2.2.2 上样浓度对黄酮吸附最的影响  39
      2.2.3 水洗体积的选择  39-40
      2.2.4 乙醇洗脱浓度对黄酮洗脱效果的影响  40
      2.2.5 乙醇洗脱体积的选择  40
      2.2.6 乙醇解析流速对黄酮洗脱效果的影响  40-43
  3. 小结与讨论  43-44
  参考文献  44-45
第四章芹菜黄酮的水解及定性研究  45-51
  1 材料与方法  45-46
    1.1 试验材料  45-46
      1.1.1 试验材料  45
      1.2.3 酸种类的选择  45
      1.2.4 盐酸浓度对水解的影响  45
      1.2.5 水解时间的影响  45-46
      1.2.6 水解水浴温度的影响  46
      1.2.7 水解正交试验  46
  2. 结果与分析  46-49
    2.1 酸的种类的选择  46
    2.2 盐酸浓度对水解的影晌  46-47
    2.3 水解时间对黄酮水解率的影响  47
    2.4 水解温度对黄酮水解率的影响  47-48
    2.5 酸水解试验正交试验  48
    2.6 酸水解正交试验结果  48-49
  3. 小结与讨论  49-50
  参考文献  50-51
第五章芹菜黄酮的高速逆流色谱分析研究  51-56
  1 材料与方法  51-52
    1.1 试验材料  51
      1.1.1 试验材料  51
      1.1.2 试验试剂  51
      1.1.3 试验仪器  51
    1.2 试验方法  51-52
      1.2.1 样品的制备  51
      1.2.2 两相溶剂系统的选择  51
      1.2.3 芹菜中芹菜黄酮的HSCCC分离  51-52
      1.2.4 高速逆流分离方法  52
      1.2.5 高速逆流分离物液相检测  52
  2 结果与分析  52-54
  3 小结与讨论  54-55
  参考文献  55-56
全文结论  56-58
  1. 本文研究内容  56
  2. 本文创新之处  56
  3. 展望  56-58
致谢  58-59
作者简介  59

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