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云南白芸豆过氧化物酶的提取及其酶学性质的研究

作　者: 魏池泉
导　师: 王敏康
学　校: 云南师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 白芸豆过氧化物酶双水相萃取壳聚糖
分类号: Q946.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

过氧化物酶[Peroxidase, POD, EC1.11.1.7(x)]是一类以血红素为辅基的酶,在生物中广泛存在,具有多种不同的生物功能,主要催化H2O2和有机过氧化物对多种有机物和无机物的氧化作用。它在蛋白质、多肽、激素、病毒、寄生虫、生物降解及神经系统等方面都有应用,具有特异性强,灵敏度高等优点。此酶已经作为一种商品化试剂广泛用于生物学研究并成为重要的诊断试剂。植物来源的过氧化物酶研究最深入的是辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP),大豆过氧化物酶由于良好的热稳定性和较宽范围pH值受到极大的重视。白芸豆过氧化物酶是从白芸豆提取凝集素和淀粉酶抑制剂后从种皮中得到的,其酶学特性与大豆过氧化物酶相似,并且云南有稳定的原料来源,有利于白芸豆的综合开发利用。本文对白芸豆种皮过氧化物酶采用了去离子水提取,分析了酶的热稳定性和酸碱稳定性。比较并摸索出提取的合适方法和条件。同时应用双水相萃取法和水溶性壳聚糖沉淀法进行了分离和纯化的初步探讨。将此酶应用于葡萄糖检测。实验结果表明,白芸豆种皮过氧化物酶的热稳定性和酸碱稳定性略低于大豆种皮过氧化物酶。去离子水提取条件为4℃、48小时、pH为7。双水相萃取法具有快速，操作简单，可在常温下操作，提取条件为10％PEG6000+12％(NH4)2SO4,pH=8。水溶性壳聚糖沉淀回收是可行的,回收条件为室温、搅拌20min、pH值为6、壳聚糖浓度在40mg/L。白芸豆过氧化物酶在葡萄糖检测上表现出与大豆过氧化物酶相同的酶活性。

云南白芸豆过氧化物酶的提取及其酶学性质的研究

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