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人支气管上皮细胞5-脂氧合酶表达与丙烯腈的活化及细胞毒性

作　者: 杨凤
导　师: 胡建安
学　校: 中南大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 5-脂氧合酶协同氧化作用蛋白表达细胞毒性 DNA损伤
分类号: R113
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

[目的]结合能肯定大豆脂氧合酶(SLO)介导丙烯腈(ACN)氧化反应的体外酶系统实验与丙烯腈对HBE 5—LOX蛋白表达、细胞毒性和DNA损伤影响的细胞实验研究,初步探讨细胞内5—LOX对外源化学物的代谢情况,试图为LOX作为细胞色素P450氧化代谢外源化合物的替代途径提供进一步的依据。[方法]体外酶系统实验：在适宜条件下,SLO与丙烯腈等在酶体系中开始反应后,用分光光度法在特定波长检测反应体系中反应终产物生成情况,并计算SLO对丙烯腈氧化代谢速率和茶多酚对代谢的抑制率。细胞实验：通过MTT试验检测不同浓度的丙烯腈对HBE存活率的影响,分别以不同浓度的丙烯腈染毒HBE 12小时,用western-blot印记法检测各组5-LOX蛋白表达的情况；同时用单细胞凝胶电泳实验检测各组的DNA损伤情况。最后检测特异性5-LOX抑制剂(AA861)对5-LOX蛋白表达和多种特异性酶抑制剂对DNA损伤的影响。[结果]在过氧化氢参与下,SLO可以协同氧化丙烯腈,氧化后生成2-氰环氧乙烷(CEO)。LOX抑制剂茶多酚可抑制该协同氧化作用,且在一定范围内呈剂量效应关系。丙烯腈可以使HBE内5-LOX蛋白表达增加,AA-861对5-LOX蛋白表达基本没有影响；丙烯腈可以对HBE产生明显细胞毒作用和DNA损伤,AA-861和萘普生可以明显抑制丙烯腈毒性和DNA损伤情况。[结论]在过氧化氢参与下,SLO可以介导丙烯腈协同氧化,茶多酚可以抑制该协同氧化作用。5-LOX在HBE内的蛋白表达是可以经丙烯腈调节的,特异性5-LOX抑制剂AA-861对其蛋白表达无明显影响。HBE可能主要通过5-LOX介导丙烯腈协同氧化,产生亲电子物质与DNA结合,使HBE产生DNA损伤,AA-861可以明显抑制该反应。

人支气管上皮细胞5-脂氧合酶表达与丙烯腈的活化及细胞毒性

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